P311在小鼠浅Ⅱ度烧伤及体外细胞创伤模型中对表皮干细胞迁移的影响

摘要：

目的 观察P311在小鼠浅Ⅱ度烧伤及体外细胞创伤模型中对表皮干细胞(ESC)迁移的作用并探讨其机制. 方法 (1)取18只C57BL/6小鼠,其中15只行背部浅Ⅱ度烧伤,于伤后6、12、24、48、72 h取创面及创周皮肤组织,各时相点3只；余下3只小鼠作为正常对照,同法取正常皮肤标本.采用生物素-链霉亲和素-过氧化物酶(SP)染色法观察P311在上述皮肤组织中的表达.(2)取6只新生的C57BL/6小鼠,连续3d腹腔注射50 μg/g溴脱氧尿苷(BrdU,2次/d)建立ESC示踪模型.7周后于其背部制作浅Ⅱ度烧伤创面.伤后72 h取创面皮肤组织制作连续切片,SP法免疫组织化学染色,观察P311阳性和BrdU阳性细胞空间共定位情况.(3)构建腺病毒空载体pAdEasy-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)及P311腺病毒表达载体pAdEasy-EGFP-P311,并进行包装.应用Ⅳ型胶原快速黏附法分离培养人ESC,按照随机数字表法将其分为P311高表达组和EGFP对照组,每组3孔,分别以pAdEasy-EGFP-P311及pAdEasy-EGFP腺病毒感染ESC.2组ESC经丝裂霉素C处理2h后行划痕实验.划痕后0(即刻)、24、48、72 h测量固定范围内划痕剩余面积,计算划痕愈合面积百分比.对数据进行独立样本t检验. 结果 (1)浅Ⅱ度烧伤后不同时相点,P311在创面不同部位的表达量各不相同.伤后创面毛囊、新生表皮中P311表达量随时间延长逐渐上升；创周表皮及毛囊的P311表达量于伤后12 h达高峰,72 h回落至正常.(2)应用BrdU标记的小鼠浅Ⅱ度烧伤创面新生表皮层可见P311阳性细胞和BrdU阳性细胞共定位.(3)划痕后48、72 h,P311高表达组ESC划痕愈合面积百分比分别为(69±31)％、(89±26)％,明显高于EGFP对照组[(35 ±12)％、(46±31)％,t值分别为-2.336、-2.611,P值均小于0.05]. 结论 P311可明显促进小鼠浅Ⅱ度烧伤创面及体外细胞创伤模型中的ESC迁移,可能在创面修复中起重要作用.

关键词：烧伤、创伤和损伤、细胞运动、P311、表皮干细胞、创面愈合

所属期刊栏目：28

分类号：R826.5(军事医学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目30973116;81171809

在线出版日期：2012-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：213-218