一氧化氮对体外培养人表皮干细胞生物学行为的影响

摘要：

目的 观察外源性NO对人表皮干细胞(ESC)脱黏附、增殖以及迁移功能的影响.方法 采用改良Ⅳ型胶原快速黏附法分离、培养人ESC,倒置相差显微镜下观察其形态；蛋白质印迹法和免疫荧光法观察ESC标志物整合素β1和细胞角蛋白19(CK19)的表达.对贴壁生长的ESC行划痕处理,用0(对照)、1、10、100、500 μmol/L NO供体S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)作用细胞12、24 h,检测细胞迁移率；Transwell实验检测SNAP(浓度同上)对ESC趋化能力的影响(计数转膜细胞).采用0、10、100、500 μmol/L SNAP作用细胞lh,黏附实验检测SNAP对ESC黏附功能的影响,计算黏附抑制率；于上述4种浓度SNAP作用0(即刻)、12、24、48 h,采用酶标仪检测ESC增殖水平,数据以吸光度值表示.对数据进行单因素方差分析和Dunnett t检验. 结果 (1)倒置相差显微镜下可见,细胞培养5～9d形成小克隆；培养10～14 d,细胞增殖明显加快.蛋白质印迹法和免疫荧光法检测结果显示,所分离的细胞均能表达CK19和整合素β1.由此鉴定该细胞为ESC.(2)与0 μmol/L SNAP作用12、24 h后细胞迁移率[(35.7±0.3)％、(45.7±5.0)％]比较,1～ 100 μmol/LSNAP均能促进ESC迁移,其中100 μmol/L SNAP作用后细胞迁移率达峰值[(48.8±2.7)％、(82.1±15.8)％,t值分别为8.34、5.10,P值均小于0.01].100 μmol/L SNAP作用后转膜细胞数显著多于0 μmol/L SNAP作用后(t =9.24,P=0.00).100、500 μmol/L SNAP作用后,ESC黏附能力明显低于0 μmol/L SNAP作用后(t值分别为4.30、4.67,P值均为0.00).100、500μmol/L SNAP作用24、48 h,细胞增殖能力明显强于0μmol/L SNAP作用后(t值为2.84 ～8.17,P值均小于0.05). 结论 适宜浓度的外源性NO对体外培养人ESC的迁移功能有促进作用.外源性NO对体外培养人ESC具有脱黏附、促增殖作用.

关键词：一氧化氮、细胞运动、表皮干细胞、创面愈合

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分类号：R644(创伤外科学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目30973116;81171809;创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室自主研究课题SKLZZ200808;SKLZZ200820

在线出版日期：2012-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：125-129