Notch信号通路对烧伤大鼠血清诱导的肺血管内皮细胞细胞间黏附分子-1的影响

摘要：

目的 探讨Notch信号通路对烧伤大鼠血清诱导的肺血管内皮细胞(PMVEC)细胞间黏附分子(ICAM)-l的影响.方法 42只SD大鼠(6～8周龄)中,随机选取30只,按随机数字表法分为假伤组(n=15)和烧伤组(n=15),烧伤组大鼠于95℃热水浸浴背部18 s造成30％总体表面积Ⅲ度烧伤,假伤组大鼠于37℃水浴中浸浴背部18 s模拟致伤.伤后6、12、24、48、72 h,烧伤组随机分别取3只大鼠,腹主动脉采血,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中ICAM-1含量,假伤组大鼠行相同检测.取剩下的12只大鼠(6～8周龄)中的6只,按前述方法造成30％总体表面积Ⅲ度烧伤,伤后24 h制备烧伤大鼠血清;剩下的6只大鼠不作处理,制备健康大鼠血清.切取10只出生3 d的SD大鼠的肺外边缘组织,组织块法培养大鼠PMVEC,倒置相差显微镜下观察原代细胞培养2、6 d后的形态特征,流式细胞术对原代培养7 d的细胞进行细胞鉴定.取处于对数生长期的第4代PMVEC进行实验,将细胞接种于6孔板中,待细胞生长至80％融合时按随机数字表法分为3组(每组设3个复孔):对照组(培养液中分别加入体积分数10％健康大鼠血清),二甲基亚砜(DMSO)+烧伤血清组、γ-分泌酶抑制剂(GSI)+烧伤血清组(分别加入3 μL/mL DMSO、75 μmol/L GSI,培养24 h后,加入体积分数10％烧伤大鼠血清刺激培养24 h),ELISA法检测PMVEC上清中ICAM-1的含量;流式细胞仪检测各组PMVEC中ICAM-1的含量;采用蛋白质印迹法检测ICAM-1蛋白表达水平,计算相对蛋白表达量;检测PMVEC的细胞黏附能力.数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验.结果(1)烧伤组大鼠伤后 6、12、24、48、72 h 血清中的 ICAM-1 含量分别为(19.77±3.03)、(22.09±3.65)、(22.44±4.04)、(25.40±2.51)、(26.37±3.07)pg/mL,显著高于假伤组的[(10.60±1.51)、(11.03±1.95)、(10.87±0.89)、(9.30±0.89)、(10.93±1.22)pg/mL],2 组比较差异均有统计学意义(t=4.699、4.466、3.181、10.490、8.097,P＜0.05).(2)原代细胞培养2 d后可见细胞从组织块边缘移出,生长较慢;培养6 d后可见细胞融合,细胞呈铺路石样生长.对原代培养7 d的细胞进行流式细胞术鉴定,结果显示CD31阳性细胞占98.6％,确定为PMVEC.(3)血清刺激培养24 h后,对照组,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量分别为1.21±0.25、2.16±0.12、3.07±0.30,3组比较差异有统计学意义(F=46.72,P＜0.05);与对照组比较,DMSO+烧伤血清组和GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量均明显增加,差异均有统计学意义(t=5.977、8.274,P＜0.05);GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量明显高于DMSO+烧伤血清组,2组比较差异有统计学意义(t=4.847,P＜0.05).(4)血清刺激培养24 h后,对照组,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组PMVEC中ICAM-1平均荧光强度分别为2 582±143、3 453±204、4 559±414,3组比较差异有统计学意义(F=37.84,P＜0.05);与对照组比较,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞中

关键词：烧伤、大鼠、血清、急性肺损伤、肺血管内皮细胞、细胞间黏附分子-1、Notch信号通路

分类号：R781.42;R392.11;R644

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：292-299