糖尿病创面中性粒细胞胞外诱捕网生成增加对巨噬细胞黑色素瘤缺乏因子2炎症体的影响

摘要：

目的 探讨糖尿病创面中增高的中性粒细胞胞外诱捕网(NET)对巨噬细胞黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症体表达和活化的影响.方法 腹腔注射链脲佐菌素诱导SD大鼠Ⅰ型糖尿病模型,制作背部全层皮肤缺损创面.将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和DNase组,以正常大鼠作为正常组.正常组和糖尿病组大鼠每日创面给予0.9％氯化钠溶液(30 uL);DNase组创面给予DNase Ⅰ30 μL(10 mg/mL),连续给药8 d1.伤后第1、5、9、14天,麻醉大鼠,拍摄创面照片.伤后第2、5、9、14天取创面组织,检测创面NET及AIM2炎症体相关蛋白表达.提取大鼠腹腔中性粒细胞和巨噬细胞.佛波酯(0.1 g/mL)刺激中性粒细胞诱导其形成NET,NET可被DNase Ⅰ降解.巨噬细胞设为对照、NET和DNase 3组,分别与未经刺激的中性粒细胞、NET以及DNase Ⅰ降解的NET共培养12 h.蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测巨噬细胞AIM2炎症体相关蛋白AIM2、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-1β前体蛋白(pro-IL-1β)、caspase-1 p20表达和p65磷酸化水平.数据采用独立样本t检验.结果 蛋白质印迹检测糖尿病组第2、5天Cit-H3、AIM2和IL-1β蛋白表达量(0.136±0.080,1.119 ±0.186,0.918±0.163;1.022±0.270,1.047±0.123,1.442±0.177)均高于正常组(0.043±0.010,0.600 ±0.060,0.172±0.176;0.215±0.420,0.747±0.052,0.556±0.179),差异有统计学意义(t=-21.153、-4.562、-5.367、-.232、-3.898、-6.012,P值均小于0.05).佛波酯可诱导中性粒细胞生成NET,NET组巨噬细胞AIM2、pro-IL-1β、IL-1β、caspase-1 p20表达和p65磷酸化水平(1.113 ±0.132,1.098 ±0.170,1.129 ±0.114,1.083±0.162)较对照组(0.251±0.067,0.068±0.237,0.105 ±0.155,0.314±0.161)明显升高,差异有统计学意义(t=-10.050、-10.388、-15.455、-5.828,P值均小于0.05).DNase组(0.729±0.092,0.549±0.115,0.701±0.172,0.496 ±0.031)则明显下调以上蛋白水平,差异有统计学意义(t=4.124、4.633、3.596、6.155,P值均小于0.05).p65核转位阻断剂(JSH-23)显著降低巨噬细胞AIM2、pro-IL-1β和IL-1β水平,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色检测显示,DNase组显著减少创面NET和AIM2荧光水平.蛋白免疫印迹显示DNase组降低糖尿病组创面中IL-1β,caspase-1 p20水平,差异有统计学意义(P＜0.05).DNase组创面愈合较糖尿病组加快,伤后第9天和第14天创面愈合率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 糖尿病创面NET生成增加可能通过活化p65,促进巨噬细胞AIM2炎症体表达活化.外源性补充DNase Ⅰ降解创面NET,可降低AIM 2炎症体活化水平,加速创面愈合.

关键词：糖尿病、伤口愈合、中性粒细胞胞外诱捕网、黑色素瘤缺乏因子2炎症体

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资助基金：国家自然科学基金面上项目81270909、81871564;上海交通大学博士创新基金BXJ201813;上海市科委自然科学基金18ZR1423800;上海市市级医院新兴前沿技术联合攻关项目SHDC12014117

在线出版日期：2019-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：124-131