转染SMDF基因的小鼠肌源性干细胞分化为施万样细胞的初步研究

摘要：

目的 将构建的Neu基因调节素-1(NRG-1)Ⅲ型感觉运动衍生因子(SMDF)真核表达载体转染肌源性干细胞(MDSC),通过与施万细胞(Schwann cell,SC)共培养液的方法,诱导转染后的MDSC分化为类SC,证实SMDF基因可促进类SC的增殖、分化,进一步验证SMDF蛋白的功能,为研究周围神经损伤后SC髓鞘化过程及分子机制奠定了实验基础.方法 (1)通过蛋白质印迹法分析小鼠脑、脊髓、背根神经节(DRG)、骨骼肌、肝脏、脾脏等组织中SMDF蛋白的表达情况,同时通过免疫组织化学染色法鉴定SMDF在DRG中的表达;(2) PCR获得小鼠SMDF基因编码区全序列,构建重组真核表达载体pEGFP-N2-SMDF;(3)应用脂质体介导的方法将真核表达载体pEGFP-N2-SMDF和空质粒pEGFP-N2转染体外培养液的MDSC,分为重组质粒组、质粒组和未转染组,检测转染前后SMDF基因和蛋白的表达情况;(4)采用细胞条件培液诱导转染SMDF基因的MDSC分化为施万样细胞,并采用免疫细胞化学方法进行鉴定.数据比较采用one-way ANOVA和t检验.结果 (1)pEGFP-N2-SMDF真核表达载体转染MDSC后,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达.(2)PCR和蛋白质印迹法结果显示,重组载体pEGFP-N2-SMDF转染后的细胞中SMDF mRNA水平和蛋白水平的表达明显增高.重组质粒组SMDF/GAPDH值为1.7321 ±0.1346,分别与空质粒组(0.5975±0.0084)和未转染质粒组(0.4816±0.0092)比较,差异均有统计学意义(t=4.1258、4.3314,P值均小于0.01).(3)转染SMDF基因的MDSC,经SC条件培液诱导后S-100β的阳性率明显增高.结论 实验证明SMDF蛋白可在MDSC中表达,pEGFP-N2-SMDF转染后的细胞中SMDF mRNA水平和蛋白水平的表达明显提高,SMDF基因可促进施万样细胞的增殖、分化.

关键词：成体干细胞、基因、小鼠、施万细胞、基因转染、周围神经损伤

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资助基金：青年科学基金项目81100950

在线出版日期：2018-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：260-268