脂多糖预处理人脐带间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响

摘要：

目的 探讨脂多糖预处理人脐带间充质干细胞(hUCMSC)的条件培养基对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响.方法 本实验按随机数字表法将HUVEC分为对照组、条件培养基组和预处理条件培养基组.首先使用100 ng/mL 脂多糖的内皮细胞培养基刺激3组HUVEC 12 h后,对照组更换为原培养基,条件培养基组更换为 hUCMSC 的条件培养基,预处理条件培养基组更换为脂多糖预处理hUCMSC的条件培养基.分别于培养24、48、72 h时点采用MTT法测定HUVEC的增殖活性;台盼蓝排除染色法检测细胞增殖的数量,流式细胞仪检测细胞的增殖周期,Hoechst染色和流式细胞仪定性定量检测细胞凋亡的情况.方差分析统计分析比较数据.结果 MTT测定结果示:培养24 h时,对照组、条件培养基组和预处理条件培养基组细胞吸光度值为0.46、0.52和0.56;培养48 h时,3组的吸光度值为0.35、0.46和0.51;培养72 h时,3组的吸光度值为0.21、0.38和0.47;在3个时间点上,条件培养基组、预处理条件培养基组的吸光度值均高于对照组,且预处理条件培养基组的细胞量高于条件培养基组.台盼蓝染色计数的结果与MTT的结果趋势类似.培养24 h时,对照组、条件培养基组和预处理条件培养基组的细胞数量为(4.554±0.103)×103、(5.251±0.091)×103、(5.585±0.038)×103个;培养48 h时,3组的细胞数量分别为(3.465±0.087)×103、(4.659±0.116)×103、(5.347±0.099)×103个;培养72 h时,3组的细胞数量是(2.079±0.127)×103、(4.063±0.052)×103、(4.950±0.104)×103个;在3个时间点上,条件培养基组、预处理条件培养基组细胞的数量均显著高于对照组,差异有统计学意义(P值均小于0.05),且预处理条件培养基组的细胞数量显著高于条件培养基组,差异有统计学意义(P值均小于0.05).流式细胞仪检测细胞增殖周期(G2/M+S期)的结果示:培养24 h时,3组细胞处于G2/M+S期的比例是(17.07±1.15)%,(22.52±1.61)%和(26.19±2.25)%;培养48 h时分别是(13.46±1.74)%,(18.67±2.07)%和(24.58±2.54)%;培养72 h时分别是(8.73±1.61)%,(14.31±1.93)%和(18.43±2.02)%;在培养的各个时间点上,条件培养基组、预处理条件培养基组细胞处于增殖周期的比例均显著高于对照组,差异有统计学意义(P值均小于0.05),预处理条件培养基组细胞处于增殖周期的比例显著高于条件培养基组,差异有统计学意义(P值均小于0.05).Hoechst染色结果和流式细胞仪检测细胞凋亡结果趋势类似,具体为:培养24 h时,对照组、条件培养基组和预处理条件培养基组细胞的凋亡率分别为(30.78±3.20)%、(23.21±1.72)%和(17.69±1.81)%;培养48 h时分别为(26.02±2.06)%、(20.04±1.83)%和(15.03±1.56)%;培养72 h时分别为(22.41±1.63)%、(15.27±1.14)%和(11.25±1.07)%;在培养24、48、72 h时间点,3组中对照组细胞的凋亡率最高,而条件培养基组和预处理条件培养基组细胞的凋亡率显著低于对照组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05),预处理条件培养基组细胞的凋亡率显著低于条件培养基组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05).结论 脂多糖预处理hUCMSC的条件培养基发挥了显著促进HUVEC增殖活性和抑制HUVEC凋亡的作用.

关键词：脂多糖类、间质干细胞、内皮细胞、预处理、细胞增殖、细胞凋亡

所属期刊栏目：12

分类号：R6 ;R54

资助基金：内蒙古自治区自然科学基金2015MS0815;内蒙古医科大学科技百万工程联合项目YKD2016KJBWLH041

在线出版日期：2017-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：169-175