白藜芦醇在烧伤血清诱导的肺微血管内皮细胞凋亡中的作用研究

摘要：

目的 探讨白藜芦醇在烧伤血清诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)凋亡中的作用及可能的分子机制.方法 (1)取5只SD大鼠背部于95℃热水浴18 s制成30％总体表面积Ⅲ度烫伤模型,伤后24 h制备烧伤大鼠血清;另取5只SD大鼠不做处理,制备正常大鼠血清.(2)体外组织块法培养大鼠PMVEC,免疫组织化学法鉴定细胞.取第3代对数生长期的细胞分别接种6孔板和12孔板,各板均分为3组(每组设3个复孔):对照组、烧伤血清组、烧伤血清±白藜芦醇组.白藜芦醇在烧伤血清刺激前2h加入(浓度20 μmol/L).(3)采用铺明胶的Transwell培养细胞后,酶联免疫吸咐法检测单层细胞通透性;采用吖啶橙-溴化乙啶法检测PMVEC的凋亡;RT-PCR检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平;Western blot法检测细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达.结果 (1)原代培养细胞生长较慢,呈铺路石样生长;传代后细胞呈均匀分布生长.细胞凝血因子Ⅷ阳性表达率为(97±3)％,鉴定为PMVEC.(2)培养24h后,对照组,烧伤血清组,烧伤血清±白藜芦醇组中细胞通透性分别为(87±16)、(220±11)、(131 ±11) ng/mL(F=207.40,P＜0.05),细胞凋亡率分别为(5.2±2.3)％、(22.3±3.7)％、(11.7±2.3)％(F=69.07,P＜0.05).与对照组比较,烧伤血清组单分子层通透性、细胞凋亡率明显增加(t值分别为18.76、10.75,P值均小于0.05);烧伤血清+白藜芦醇组内皮细胞单分子层通透性、细胞凋亡率较烧伤血清组明显减少(t值分别为6.21、5.47,P值均小于0.05).(3)培养24 h后,对照组,烧伤血清组,烧伤血清+白藜芦醇组TNF-α以及IL-1β的mRNA水平分别为1.0±0.1、3.8±1.3、1.6±0.7(F=22.47,P＜0.05);1.0±0.1、3.3±1.5、1.7±0.4(F=13.01,P＜0.05);SIRT1以及Cleaved Caspase3的蛋白表达量分别为1.0±0.3、2.8±0.5、3.7±0.6(F=69.99,P＜0.05);1.0±0.2、3.3±0.5、1.9±0.6(F=28.78,P＜0.05);与对照组比较,烧伤血清组SIRT1、Cleaved Caspase3的蛋白表达量明显增加(t值分别为9.93、12.67,P值均小于0.05);烧伤血清+白藜芦醇组较烧伤血清组SIRT1的蛋白表达量明显增加(t=12.34,P＜0.05)、Cleaved Caspase3蛋白表达明显减少(t=4.12,P值均小于0.05).结论 白藜芦醇可显著抑制烧伤血清诱导的PMVEC凋亡,其机制可能与SIRT1介导的Cleaved Caspase3的下调相关.

关键词：烧伤、内皮细胞、细胞凋亡

所属期刊栏目：10

分类号：R28;R73

资助基金：国家自然科学基金面上项目81372051;总参军事医学和老年病科研基金项目ZCWS14B06

在线出版日期：2015-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：9-13