来那度胺联合替莫唑胺对U251/TR细胞耐药性及 MGMT基因表观遗传修饰的影响

摘要：

目的:探讨来那度胺(LEN)联合替莫唑胺（TMZ）对TMZ耐药性人脑胶质母细胞瘤系U251/TR细胞增殖、侵袭、耐药性及O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(
MGMT)基因表观遗传修饰的影响。
方法:将前期应用分步诱导法成功构建的U251/TR细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、LEN组、TMZ组及LEN+TMZ组，其中DMSO组不进行任何药物干预，LEN组、TMZ组、LEN+TMZ组分别按LEN 100 μmol/L、TMZ 200 μmol/L、LEN 100 μmol/L+TMZ 200 μmol/L浓度处理U251/TR细胞（给药1次/24 h)。处理后24、48、72、96 h时，采用磺酰罗丹明B比色分析法检测细胞增殖率；处理后96 h时，采用Transwell实验检测细胞侵袭能力，采用流式细胞术检测细胞增殖周期，采用Western blotting实验、免疫组化染色、免疫荧光染色检测细胞中MGMT水平，采用RT-PCR法检测细胞中
MGMT mRNA水平，采用甲基化特异性PCR检测细胞中
MGMT基因启动子区甲基化情况。
结果:处理后24、48、72、96 h时，LEN+TMZ组的细胞增殖率较TMZ组、LEN组、DMSO组均明显降低，差异均有统计学意义(
P<0.05)。处理后96 h时，LEN+TMZ组的穿膜细胞数较其他3组均明显减少，G0/G1期细胞比例较其他3组均明显升高，差异均有统计学意义(
P<0.05)；TMZ组及LEN+TMZ组细胞中MGMT蛋白、mRNA水平较LEN组、DMSO组均明显降低，差异均有统计学意义(
P<0.05)；TMZ组及LEN+TMZ组中胞浆内MGMT表达呈强阳性或中等阳性的细胞数量较LEN组、DMSO组明显更少，MGMT荧光强度(+)较LEN组(+++)、DMSO组(+++)明显减弱。各组细胞中
MGMT基因启动子区均为未甲基化状态。
结论:LEN单药对U251/TR细胞的增殖、侵袭无明显抑制作用，而LEN联合TMZ能抑制该细胞的增殖、侵袭并逆转其耐药性，但其机制与
MGMT基因启动子区甲基化状态改变无关。

关键词：神经胶质瘤、来那度胺、替莫唑胺、耐药性、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶

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资助基金：国家自然科学基金81772290;济南市卫生健康人才优秀青年技术骨干项目济卫科教发[2019]7号;济南市卫生健康委员会科技计划项目2020-4-126;National Natural Science Foundation of China81772290;Ji'nan Health Talents Outstanding Young Technical Backbone ProjectJi'nan Health Science and Education [2019]7;Science and Technology Project of Ji'nan Health Commission2020-4-126

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：865-872