β-淀粉样蛋白1-42寡聚体的制备、鉴定及其对星形胶质细胞的作用

摘要：

目的 探讨β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)寡聚体的制备和鉴定方法,并探讨其对体外培养的小鼠星形胶质细胞的作用. 方法 (1)溶解Aβ1-42多肽后取100 μmol/L Aβ1-42多肽母液,分别经4℃孵育24 h、4℃孵育72 h、37℃孵育24 h、37℃孵育72 h处理,应用电子显微镜观察和Western blotting对不同孵育条件制备的Aβ1-42进行鉴定.(2)将不同浓度的Aβ1-42寡聚体(由Aβ1-42多肽母液经4℃孵育24 h制备)加入到体外培养的星形胶质细胞中,采用CCK-8法检测不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、0.1、0.5、1、5、10、50、100 μmol/L)处理后星形胶质细胞存活率的变化,采用免疫荧光染色检测不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、1、10、50 μmol/L)处理后星形胶质细胞的形态变化,采用Western blotting检测不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、1、10、50 μmol/L)处理后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及水通道蛋白-4(AQP4)表达的改变. 结果 (1)Aβ1-42多肽经不同孵育条件处理后,在电子显微镜观察和Western blotting检测中分别表现出不同形态和聚合度,其中经4℃孵育24 h制备的Aβ1-42寡聚体主要呈10nm颗粒状和短丝状物质的混合体;相对分子质量10 000左右的蛋白表达量减少,相对分子质量15 000～25 000的蛋白表达量增多.(2)不同浓度Aβ1-42寡聚体刺激星形胶质细胞24 h后,CCK-8法检测结果显示,细胞存活率随着浓度增加逐渐升高,其中与0μmol/L组比较,10、50及100μmol/L Aβ1-42寡聚体组细胞存活率显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);免疫荧光染色观察发现,与0 μmol/L组比较,1、10及50μmol/L Aβ142寡聚体组星形胶质细胞呈活化状态,表现为胞体增大,细胞突起增多、伸长,呈放射状,GFAP荧光强度增强;Western blotting检测结果显示,随着Aβ1-42寡聚体浓度的增加,GFAP及AQP4蛋白表达均有升高趋势,其中与0μmol/L组比较,10及50 μmol/L Aβ142寡聚体组GFAP蛋白表达均明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);与0μmol/L组比较,1、10及50 μmol/L Aβ1-42寡聚体组AQP4蛋白表达均明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 100 μmol/L Aβ1-42多肽经4℃孵育24 h能够制备Aβ1-42寡聚体.Aβ1-42寡聚体能激活星形胶质细胞并上调AQP4的表达,这可能是机体的一种自我保护机制.

关键词：阿尔茨海默病、β-淀粉样蛋白、星形胶质细胞、水通道蛋白-4

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分类号：R749.1+6(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金61072033广东省自然科学基金8151051501000053、2014A030313273National Natural Science Foundation of China61072033;National Natural Science Foundation of Guangdong Province8151051501000053,2014A030313273

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：114-120