ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪对海马神经元氧糖剥夺损伤的保护作用及其分子机制

摘要：

目的 探讨ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂二氮嗪(DZX)对海马神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用及其分子机制. 方法 构建海马神经元OGD模型和海马区脑片OGD模型,并采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测海马神经元活性.将不经任何处理的海马神经元和海马区脑片设为正常对照组,将经OGD预处理的海马神经元和海马区脑片设为OGD组,将DZX或DZX+5-羟基癸酸甘油酯(5-HD)处理的经OGD预处理的海马神经元和海马区脑片分别设为OGD+DZX组和OGD+DZX+5-HD组.采用流式细胞术检测各组海马神经元凋亡情况,采用RT-PCR检测各组海马神经元凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3mRNA表达水平;采用TUNEL染色检测各组海马区脑片中神经元凋亡情况,采用膜片钳检测各组海马区脑片中KATP电流情况. 结果 MTT检测发现:与对照海马神经元相比,经OGD预处理后0、4、8、12h海马神经元的吸光度值明显下降,差异均统计学意义(P＜0.05).LDH释放实验检测发现:与对照海马神经元相比,经OGD预处理后0、4、8、12h海马神经元LDH的释放量明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术和TUNEL法检测共同显示:与正常对照组海马神经元相比,OGD组海马神经元凋亡率显著增多,差异有统计学意义(P＜0.05);OGD+DZX组海马神经元凋亡率比OGD组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);OGD+DZX+5-HD组海马神经元凋亡率比OGD+DZX组显著增加,但仍比OGD组海马神经元凋亡率低,差异均统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示:与正常对照组相比,OGD组Bax、Caspase-3 mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);DZX+OGD组Bax、Caspase-3 mRNA表达水平比OGD组明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);OGD+DZX+5-HD组Bax、Caspase-3 mRNA表达水平明显高于DZX+OGD组,差异均有统计学意义(P＜0.05).DZX+OGD组和OGD+DZX+5-HD组Bcl-2 mRNA表达水平显著高于正常对照组和OGD组,差异有统计学意义(P＜0.05).膜片钳检测显示:相对正常对照组KATP电流密度(53.3±5.3),OGD组电流密度(93.2±5.4)显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05);DZX+OGD组电流密度(53.2±3.0)恢复到正常对照组大小,与OGD组比较差异有统计学意义(P＜0.05);OGD+DZX+5-HD组电流密度(83.4±4.8)比DZX+OGD组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),接近于OGD组. 结论 KATP开放剂DZX能够通过抑制凋亡因子Bax、Caspase-3的表达从而保护海马神经元抵抗凋亡.

关键词：ATP敏感性钾通道、二氮嗪、氧糖剥夺、海马神经元、细胞凋亡

所属期刊栏目：15

分类号：R329.2(人体形态学)

在线出版日期：2016-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：445-451