脐带间充质干细胞向胶质瘤干细胞趋向性机制研究

摘要：

目的 研究脐带间充质干细胞(UCMSCs)向胶质瘤干细胞的趋化迁移功能及其内在机制. 方法 原代分离培养并鉴定UCMSCs,用软、硬琼脂糖凝胶培养基质联合胶质瘤干细胞维持因子[表皮生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]诱导胶质瘤干细胞限定在静息、增殖和分化状态,分别为软琼脂+EGF+bFGF组、硬琼脂+EGF+bFGF组、硬琼脂组,持续培养3组干细胞克隆球7d并绘制克隆球直径生长曲线;培养72 h后流式细胞仪检测3组胶质瘤干细胞的细胞周期;免疫荧光染色检测3组胶质瘤干细胞克隆球CD133、增殖细胞相关的核抗原(Ki67)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;Transwell实验检测UCMSCs向不同状态胶质瘤干细胞的迁移能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同状态胶质瘤干细胞培养液中干细胞因子(SCF)、基质衍生因子-1(SDF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达;用培养72 h的3组干细胞的条件培养液为培养基培养UCMSCs,Western blotting检测UCMSCs中c-Kit、趋化因子受体-4(CXCR4)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)蛋白的表达. 结果 培养2～7 d时硬琼脂+EGF+bFGF组和硬琼脂组胶质瘤干细胞克隆球直径大于软琼脂+EGF+bFGF组,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期检测显示软琼脂+EGF+bFGF组、硬琼脂+EGF+bFGF组、硬琼脂组胶质瘤干细胞分别限定在静息、增殖和分化状态;软琼脂+EGF+bFGF组胶质瘤干细胞克隆球高表达CD133 [(95.79±5.31)％],硬琼脂+EGF+bFGF组细胞克隆球高表达Ki67 [(89.39±7.45)％]、GFAP[(63.49± 16.54)％];硬琼脂组细胞克隆球高表达GFAP[(97.36±3.48)％];Transwell实验显示硬琼脂+EGF+bFGF组细胞迁移百分率高于软琼脂+EGF+bFGF组、硬琼脂组,差异有统计学意义(P＜0.05);硬琼脂+EGF+bFGF组条件培养液中SCF、SDF-1和VEGF蛋白的含量高于软琼脂+EGF+bFGF组和硬琼脂组,差异均有统计学意义(P＜0.05);UCMSCs培养于硬琼脂+EGF+bFGF组条件培养液中时c-Kit、CXCR4和VEGFR蛋白表达水平均高于软琼脂+EGF+bFGF组和硬琼脂组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 UCMSCs向静息状态下的胶质瘤干细胞存在靶向迁移功能缺陷,SCF/c-Kit、SDF-1/CXCR4和VEGF/VEGFR轴表达缺陷可能是其潜在的内在机制.

关键词：神经胶质瘤、肿瘤干细胞、间充质干细胞、趋向性

所属期刊栏目：14

分类号：R730.264(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;天津市卫生局科技项目;天津市卫生局科技项目

在线出版日期：2016-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1189-1195