MiR-153对胶质母细胞瘤干细胞生物学特性的影响

摘要：

目的 培养胶质母细胞瘤干细胞,观察microRNA(miR)-153对其生物学功能的影响,探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用. 方法 体外原代培养胶质母细胞瘤组织,免疫磁珠法分选CD133+细胞;免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白(nestin),分化后细胞神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)的表达进行鉴定.RT-PCR检测分选后CD133+细胞、CD133-细胞miR-153的表达;将人miR-153模拟体和无意义寡核苷酸链(NC)分别转染胶质母细胞瘤干细胞作为miR-153、NC组,7d后用成球试验检测miR-153对胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力的影响.RT-PCR、免疫荧光染色分别检测2组细胞CD133、nestin、GFAP、MAP2 mRNA和蛋白的表达.转染后24、48、72、96和120 h CCK-8法检测2组细胞存活率.转染后3d流式细胞仪检测2组细胞凋亡率. 结果 培养的胶质母细胞瘤干细胞表达干细胞标记物CD133、nestin,分化后细胞表达星形胶质细胞的标志物GFAP、神经元的标志物MAP2;分选后CD133+细胞中miR-153的表达低于CD133-细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).转染后7 dNC组细胞一、二次成球数目均高于miR-153组,差异有统计学意义(P＜0.05); RT-PCR检测显示与NC组比较,miR-153组细胞CD133、nestin mRNA表达降低,GFAP、MAP2 mRNA表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色与RT-PCR检测结果一致;转染后48、72、96 h miR-153组的细胞存活率均低于NC组,差异均有统计学意义;流式细胞仪检测显示miR-153组的细胞凋亡率(9.41％±1.98％)高于NC组(4.28％±0.31％),差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 上调miR-153可能成为新的针对胶质母细胞瘤干细胞的治疗策略.

关键词：胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤干细胞、miR-153、自我更新、多向分化

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分类号：R730.264(肿瘤学)

资助基金：广东省医学科研基金B2014417;惠州市科技计划项目20140802

在线出版日期：2015-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：233-238