硫化氢减轻血红素诱导海马神经元铁死亡的体外研究

摘要：

目的:探究硫化氢(H
2S)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的作用。
方法:取小鼠海马神经元细胞株HT-22，将其分为空白对照组和不同浓度(50、75、100、125 μmol/L)的血红素组。血红素组细胞与血红素共培养24 h构建损伤模型。取HT-22细胞，将其分为75 μmol/L血红素组和75 μmol/L血红素+不同浓度(50、100、200 μmol/L)硫氢化钠(NaHS)组，后者与血红素和NaHS共培养24 h。采用CCK-8法检测各组细胞的存活率，蛋白质免疫印迹(WB)法测定溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达量；采用钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)双荧光染色法检测活细胞和死细胞，活性氧荧光探针(DCFH-DA)检测活性氧含量，透射电镜观察细胞的超微结构，亚铁离子(Fe
2+)荧光探针检测Fe
2+含量，免疫荧光染色法检测GPX4的表达。
结果:CCK-8和WB结果显示，与空白对照组比较，不同浓度血红素组HT-22细胞的存活率下降、SLC7A11和GPX4的表达水平降低，且均随着血红素浓度的升高呈明显的下降趋势。差异均有统计学意义(均
P<0.05)。CCK-8结果显示，75 μmol/L血红素+不同浓度(50、100、200 μmol/L)NaHS组较75 μmol/L血红素组的细胞存活率均有不同程度增加。与75 μmol/L血红素组比较，Calcein-AM/PI双荧光染色结果显示，75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的PI阳性细胞减少；活性氧和Fe
2+检测结果显示，75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的活性氧及Fe
2+水平下降；WB和免疫荧光染色法结果显示，75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的SCL7A11、GPX4蛋白表达增加。上述数据差异均有统计学意义(均
P<0.05)；透射电镜显示，75 μmol/L血红素+100 μmol/L NaHS组的线粒体皱缩、嵴减少等细胞铁死亡特征性改变较75 μmol/L血红素组减少。
结论:H
2S通过降低血红素诱导的氧化应激损伤及铁离子累积，提高血红素损伤的HT-22细胞的SLC7A11、GPX4活性，减轻铁死亡，发挥细胞保护作用。

关键词：硫化氢、海马、神经元、体外研究、铁死亡、氧化应激

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在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：401-408