荧光素酶标记胶质瘤细胞模型的构建及其在溶瘤病毒治疗中的应用

摘要：

目的:构建荧光素酶标记的患者来源胶质瘤细胞模型，并探讨其在溶瘤1型单纯疱疹病毒(oHSV-1)及溶瘤腺病毒(oAD)治疗中的应用。方法:显微镜下观察前期建立的患者来源胶质瘤细胞(命名为U022细胞)的形态特征；通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光实验对患者来源U022细胞进行鉴定；通过CCK-8实验测定细胞增殖曲线(
n＝4)；通过慢病毒感染及嘌呤霉素筛选方法获得携带荧光素酶标记的患者来源U022细胞，设置阴性对照组和荧光素酶慢病毒感染组；通过活体成像系统(IVIS)及CCK-8实验测定oHSV-1和oAD对患者来源U022细胞的作用，根据不同的病毒感染复数(0、0.001、0.01、0.1、1、10，每组
n＝4)的梯度进行分组。
结果:患者来源U022细胞符合胶质瘤细胞的形态特征；细胞增殖曲线分析显示，U022细胞增殖较快，细胞倍增时间为19.2 h；进一步行免疫荧光实验显示U022细胞中GFAP呈阳性表达。经嘌呤霉素筛选成功获得荧光素酶标记的胶质瘤细胞(U022-luc)，并且荧光素酶发光实验显示细胞的荧光强度随着细胞数量的增加而增强，呈线性正相关(
R2＝0.97,
P<0.001)。IVIS生物素发光实验及CCK-8实验检测显示，oHSV-1和oAD均对U022-luc细胞有显著的毒性作用，并且随着滴度的增加，病毒的作用加强(均
P<0.01)；当病毒感染复数等于10时，oHSV-1对U022-luc细胞的抑制率分别为(68.77±5.96)%和(66.27±4.89)%，而oAD对U022-luc细胞的抑制率分别为(64.34±3.13)%和(69.73±4.87)%。
结论:体外可成功构建荧光素酶标记的患者来源胶质瘤细胞模型；该细胞模型可应用于oHSV-1和oAD治疗的定量研究中。

关键词：神经胶质瘤、溶瘤病毒、荧光素酶、溶瘤1型单纯疱疹病毒、溶瘤腺病毒

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资助基金：北京市自然科学基金7182026，7222019;Beijing Municipal Natural Science Foundation7182026, 7222019

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：843-848