基质硬度通过YAP促进脑胶质瘤细胞上皮－间质转化和血管生成拟态形成的实验研究

摘要：

目的:探讨基质硬度通过yes相关蛋白(YAP)促进脑胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)和血管生成拟态(VM)形成的机制。方法:在不同基质硬度条件下培养人脑胶质瘤U87细胞株，0.2、16.0和64.0 kPa 3种硬度分别代表正常大脑、胶质瘤和极度僵硬。以CCK8实验检测胶质瘤细胞的增殖能力，采用免疫荧光染色检测YAP细胞定位的改变，以实时定量PCR检测YAP靶基因CTGF、CRY61的表达，以蛋白印迹实验检测YAP及细胞增殖信号Akt、ERK 1/2的磷酸化表达。通过免疫荧光染色和蛋白印迹实验检测EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin、Twist的表达。在软、硬基质3D培养下检测VM形成的情况。转染shYAP慢病毒后，检测YAP干扰对基质硬度作用于胶质瘤细胞的增殖、间质蛋白(Vimentin和Twist)表达和VM形成的影响。结果:随着基质硬度的增高，胶质瘤细胞的增殖活性及其增殖信号通路Akt、ERK 1/2的磷酸化表达增加(均
P<0.05)，胶质瘤细胞的YAP核转位增加，磷酸化YAP的表达逐渐下降(
P<0.05)，而CTGF和CRY61基因的表达均升高(均
P<0.05)。免疫荧光染色和蛋白印迹实验结果表明，随着基质硬度的增高，EMT元件Vimentin、Twist的表达增高，上皮标志E-cadherin的表达减低(均
P<0.05)。与软基质3D培养下相比，硬基质培养条件下U87细胞VM管样结构的形成增多(
P<0.05)。干扰YAP的表达可减低较高的基质硬度促进胶质瘤细胞增殖、Vimentin和Twist的表达以及VM形成的作用(均
P<0.05)。
结论:基质硬度可通过YAP促进胶质瘤细胞的增殖、EMT以及VM形成，靶向调控基质硬度和YAP可能可以作为胶质瘤治疗的新策略。

关键词：神经胶质瘤、基质硬度、Yes相关蛋白、上皮间质转化、血管生成拟态

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资助基金：国家自然科学基金81802929;中国博士后科学基金2016M592315;National Natural Science Foundation of China81802929;China Postdoctoral Science Foundation2016M592315

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：294-300