Circ-ZEB1对胶质瘤细胞生物学特性的影响

摘要：

目的 探讨circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭以及迁移的影响.方法 分别在30例胶质瘤组织和8例正常脑组织(均来源于中山大学孙逸仙纪念医院神经外科)、胶质瘤细胞株(A172和U251)以及正常胶质细胞株(HA1800)中采用实时荧光定量PCR法检测circ-ZEB1的表达.采用si-circ-ZEB1转染A172和U251细胞以敲低circ-ZEB1.按照si-circ-ZEB1的种类分为si-1组和si-2组(分别转染si-circ-ZEB1-1、si-circ-ZEB1-2),并设立对照组(siRNA-NC阴性组,转染siRNA-NC).以CCK-8法检测circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖的影响.分别采用划痕实验和Transwell实验观察circ-ZEB1对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响.应用CircNet数据库分析评价circ-ZEB1的circRNA-miRNA的基因调控网络,以双荧光素酶报告基因实验验证circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p的互作关系.结果 Circ-ZEB1在胶质瘤组织中的表达高于正常脑组织(12.16±1.31对比6.84 ±0.56,P=0.001);相对于低级别胶质瘤[世界卫生组织(WHO)分级为Ⅰ～Ⅱ级],高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ～Ⅳ级)组织中的circ-ZEB1表达更高(13.77±3.27对比7.50±1.82,P=0.001);且A172和U251的circ-ZEB1相对于HA 1800的表达水平分别为2.91 ±0.30和3.32±0.20(均P＜0.01).CCK-8实验结果表明,与对照组相比,si-1组和si-2组的生长均明显受到抑制,A172细胞的增殖能力分别降低了40.0％和57.1％(均P＜0.01),U251细胞的增殖能力分别降低了35.3％和48.5％(均P＜0.01).划痕实验中,si-1组和si-2组的迁移能力较对照组均明显受到抑制(均P＜0.05);Transwell实验结果显示,si-1组和si-2组细胞的侵袭能力均低于对照组(均P＜0.01).CircRNA-miRNA的基因调控网络检测结果显示,circ-ZEB1可与多种miRNA相互作用,调节其表达并影响其下游蛋白的功能.双荧光素酶报告基因实验结果提示,circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p存在互作关系.结论 Circ-ZEB1在胶质瘤组织和细胞株中呈高表达,下调circ-ZEB1能抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭以及迁移能力,circ-ZEB1能通过与多种miRNA相互作用而发挥其功能.

关键词：神经胶质瘤、环状RNA ZEB1、细胞迁移分析、侵袭

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资助基金：国家自然科学基金81672507National Natural Science Foundation of China81672507

在线出版日期：2019-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：722-728