NAAG肽酶基因剔除小鼠模型的建立及鉴定

摘要：

目的 建立N-乙酰天冬氨酰谷氨酸(NAAG)肽酶基因剔除小鼠模型,为在体研究NAAG肽酶基因的生物学功能并揭示其在脑损伤后继发性脑损害进程中的所起的作用创造条件.方法 根据小鼠NAAG肽酶基因组的序列,设计基因剔除策略,构建基因剔除载体NAAG-KO-pBR322,以电穿孔方法将基因剔除载体导入胚胎干细胞(ES),应用G418和更昔洛韦进行正负筛选,获得双抗性克隆,聚合酶链式反应(PCR)鉴定并测序获得正确同源重组的ES细胞克隆.结果 同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚后获得11只嵌合率＞50％嵌合体雄性小鼠,嵌合体小鼠与C57 BL/6J雌鼠交配后获得11只杂合子小鼠,其中雄性7只,雌性4只.在雌、雄杂合子小鼠交配的后代中获得7只纯合子小鼠,PCR鉴定其基因型,逆转录PCR (RT-PCR)提示该基因鼠未表达NAAG肽酶.结论 我们成功建立了NAAG肽酶基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象；初步的表型观察未发现NAAG肽酶基因剔除小鼠出现异常改变.

关键词：N-乙酰天冬氨酰谷氨酸、NAAG肽酶基因、基因剔除、脑损伤

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分类号：R651.1(外科学各论)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30670719,81070990;上海市科委基金资助项目10QH1401700;上海市级医院临床科研资源平台共享基金资助项目SHDC12007708

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：221-226