蛋白酶体抑制剂对神经细胞前咽缺陷蛋白-1表达的影响

摘要：

目的 探讨神经细胞内前咽缺陷蛋白-1(Aph-1)的蛋白降解是经蛋白酶体途径还是经溶酶体途径介导.方法 在人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达Aph-1细胞株的基础上,应用蛋白酶体和溶酶体酶抑制剂分别处理Aph-1细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术(Pulse-chase)、免疫荧光双标等技术,检测细胞内Aph-1的蛋白表达变化.结果 Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂能显著提高神经细胞内源性和外源性Aph-1的蛋白表达水平,且高度特异的蛋白酶体抑制剂乳胞素(Lactacystin)对Aph-1表达的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;而非蛋白酶体蛋白酶抑制剂ALLM和溶酶体酶抑制剂对Aph-1的蛋白表达无影响;Pulsechase结果显示,蛋白酶体抑制剂可增强细胞内新合成Aph-1的表达水平,其增强作用是通过阻止35S-Aph-1的蛋白降解实现;免疫荧光双标结果显示,Aph-1与泛素在细胞内共存.结论 神经细胞内Aph-1的蛋白降解由蛋白酶体途径介导,与溶酶体途径无关;Aph-1在降解之前经泛素化修饰.

关键词：神经元、膜蛋白质类、蛋白酶抑制药

所属期刊栏目：43

分类号：R9(药学)

资助基金：教育部重点项目资助计划209102;重庆市首届优秀人才资助计划渝教人[2009]2号;重庆市教委资助计划KJ090328;重庆医科大学重点课题资助项目XBZD200702

在线出版日期：2010-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：795-800