克隆测序方法检测三核苷酸重复次数的可靠性

摘要：

目的 探讨克隆测序技术用于检测三核苷酸(CAG)重复次数的可靠性.方法 对1例临床确诊的遗传性脊髓小脑性共济失调1型(SCA1)患者,PCR法扩增ATXN1基因的CAG重复次数,8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(DPAGE)分离PCR产物以协助确诊.2.5%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物的大小片段,割胶回收大小片段测序.另外将割胶回收的大片段进行TA克隆测序.结果 DPAGE提示大片段存在CAG的异常扩增,故该患者可确诊为SCA1.PCR产物大小片段直接测序结果为:小片段为26次CAG重复,大片段为47次重复.而将大片段克隆测序后,则有50、47、46、41、32、28、27、26、25及24次共10种不同的CAG重复次数,而且出现了CCG、CGG、CTG、CAA、TAT等序列变异现象.结论 克隆测序检测CAG重复次数会造成重复次数变异,且存在各种碱基变异.因此不宜单用TA克隆测序检测CAG重复次数及筛查碱基变异,需联合应用多种方法以提高结果的可靠性.

关键词：脊髓小脑共济失调、三核苷酸重复、神经组织蛋白质类、核蛋白质类、克隆、分子、可重复性、结果

所属期刊栏目：43

分类号：R4(临床医学)

资助基金：福建省高校创新团队培育计划项目FMU-RT002;复旦大学特聘教授华山医院配套基金资助项目

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：659-663