泛素依赖的蛋白水解通路在转染脊髓小脑性共济失调3型基因的PC12细胞中的定位及作用

摘要：

目的分析泛素依赖的蛋白水解通路(UPP)在转染了脊髓小脑性共济失调3型(SCA3)基因的PC12细胞中的定位及作用.方法构建含有SCA3正常与突变基因在内的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFPC1-ataxin3 Q28、pEGFPC1-ataxin3 Q84)后转染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,转染后24、72、120 h免疫荧光检测ataxin3、泛素(ubiquitin)、蛋白水解酶核心成分20S及热休克蛋白40、70(Hsp40、Hsp70)在细胞内的分布情况,观察其与核内包涵体(INIs)共定位的情况;给予蛋白水解酶抑制剂lactacystin (10 μmol/L)后台盼蓝染色观察细胞存活率的变化.结果正常蛋白ataxin3 Q28于胞质、胞核广泛分布,而突变蛋白ataxin3 Q84多集中于胞核内;ubiquitin在两组的表现与目的蛋白一致.随着时间的延长20S及Hsp40、Hsp70细胞核内与INIs共定位,形成密集荧光.正常对照组与突变组120 h时INIs形成数目在Hsp40组分别为18.40±3.36、75.00±5.09;Hsp70组分别为15.43±3.05、74.75±4.99;20S组分别为4.20±1.92、92.61±3.65,统计学处理正常对照组与突变组之间P值分别为0.000、0.043、0.027,差异有统计学意义;突变组给予lactacystin后细胞死亡明显增加,前后对比120 h时细胞死亡数目分别为77.50±3.33、94.67±1.82,统计学处理前后组之间P值为0.000,差异有统计学意义.结论 UPP通路中ubiquitin、20S以及重要的辅助成分Hsp40、Hsp70与ataxin3以及由此形成的INIs紧密地共定位,抑制UPP通路中的20S活性导致细胞死亡明显增加,推测UPP在SCA3发病机制中发挥重要的作用,对UPP的干预有可能成为SCA3治疗的一个途径.

关键词：脊髓小脑共济失调、泛素、热休克蛋白质类、神经组织蛋白质类、转染、PC12细胞

所属期刊栏目：38

分类号：R3(基础医学)

资助基金：卫生部临床学科重点项目2001321;国家"211"工程建设项目98138

在线出版日期：2006-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：690-693