分化拮抗非蛋白编码RNA调控乳腺癌细胞增殖的机制研究

摘要：

目的:研究分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)在乳腺癌中可能的作用机制。方法:使用定量RT-PCR检测DANCR在2017年1月至2018年1月东南大学附属中大医院收治的26例未行新辅助治疗的乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织中以及正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)和不同乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3)中的表达水平。分别用阴性对照、短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体转染MDA-MB-231细胞，得到阴性对照组、shRNA(381)和shRNA(766)3组细胞。分别采用MTT、Transwell实验、流式细胞技术检测3组细胞增殖、迁移、凋亡和细胞周期的差别。采用Western blot检测3组细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达的变化。乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织中DANCR表达量的组间比较采用配对t检验。以DANCR表达中位数1.344作为截止值，将患者分为DANCR高表达组和DANCR低表达组，采用Fisher精确概率法比较2组患者临床病理特征的差别。4种细胞系中DANCR表达量的组间比较、3组MDA-MB-231细胞存活率、细胞迁移数、凋亡细胞比例、细胞周期数比例和cyclin D1和CDK4蛋白表达量的比较均采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD法。结果:(1)DANCR在乳腺癌组织中的表达量高于癌旁正常组织，差异具有统计学意义[2.02±0.33比1.07±0.03，t＝－2.875, P＝0.008)]。26例患者中DANCR高表达组13例，DANCR低表达组13例，2组患者的TNM分期、ER表达比较，差异具有统计学意义(P＝0.002、0.047)。(2)乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞系MCF-10A中DANCR的表达量分别为1.46±0.23、2.33±0.22、2.14±0.08和1.00±0.09，组间比较差异具有统计学意义(F＝35.656，P<0.001)。与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比，SK-BR-3细胞系和MDA-MB-231细胞系中的DANCR表达量均显著增加(P均<0.001)。(3)DANCR表达量在阴性对照组、shRNA(381)和shRNA(766)3组细胞中分别为1.00±0.07、0.08±0.01和0.28±0.02，组间比较差异有统计学意义(F＝340.619，P<0.001)。与阴性对照组相比，shRNA(381)和shRNA(766)细胞中的DANCR表达量均降低(P均<0.001)。(4)3组细胞的吸光度值分别为1.226±0.092、0.985±0.097和0.611±0.032，细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(87.10±9.52)%和(53.13±4.57)%，组间比较差异具有统计学意义(F＝31.511，P＝0.001)。与阴性对照组相比，shRNA(766)细胞的细胞存活率降低(P＝0.005)。(5)3组的细胞迁移数分别为(880.00±78.46)个、(56.00±2.82)个和(76.66±25.50)个，组间比较差异具有统计学意义(F＝118.550，P＝0.001)。与阴性对照组相比，shRNA(381)和shRNA(766)细胞的细胞迁移数均降低(P均<0.001)。(6)3组细胞的凋亡率分别为(18.03±0.33)%、(18.10±0.11)%和(18.22±0.08)%，3组间比较差异无统计学意义(F＝0.445，P＝0.677)。(7)3组细胞G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例比较，差异具有统计学意义(F＝84.482、40.702、93.691，P＝0.002、0.007、0.002)；与阴性对照组相比，shRNA(381)和shRNA(766)细胞的G0/G1期细胞比例更高，G2/M期细胞比例更低(P＝0.001、0.014；P＝0.009、0.001)，S期细胞比例仅shRNA(381)高于阴性对照组(P＝0.009)。(8)3组细胞cyclin D1表达量分别为1.03±0.09、0.91±0.03和0.47±0.03，CDK4表达量分别为1.06±0.02、0.85±0.04和0.53±0.02，组间比较差异均有统计学意义(F＝48.241、33.479，P＝0.005、0.009)。shRNA(766)细胞的cyclin D1和CDK4表达量均低于阴性对照组(P＝0.003、0.004)。shRNA(381)细胞仅CDK4表达量低于阴性对照组(P＝0.028)。结论:DANCR在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中高表达，抑制DANCR表达则cyclinD1和CDK4表达下降，细胞周期阻滞于G0/G1期，从而抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移。

关键词：乳腺肿瘤、RNA，长链非编码、增殖、迁移、细胞周期

所属期刊栏目：17

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金资助项目81502287

在线出版日期：2023-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：21-29