肿瘤相关成纤维细胞自噬对三阴性乳腺癌细胞转移的影响

摘要：

目的 探讨三阴性乳腺癌 (TNBC) 细胞和肿瘤相关成纤维细胞 (CAFs) 共培养环境下, CAFs自噬促进TNBC细胞转移的作用机制.方法 (1) 分离和鉴定CAFs:采用前瞻性研究方法收集2015年1月至2016年12月期间, 就诊于南方医科大学珠江医院的6例TNBC患者 (临床分期Ⅱ～Ⅲ期) 的肿瘤组织和癌旁正常组织, 从这些标本中分离CAFs和正常成纤维细胞 (NFs) .进一步采用荧光抗体标记抗α平滑肌肌动蛋白 (α-SMA), 并计算α-SMA阳性细胞比例, 采用Western blot检测CAFs和NFs的α-SMA表达水平, 以鉴定CAFs为本实验所需. (2) 评估CAFs自噬水平:利用Western blot检测CAFs组、NFs组和CAFs+3-MA组 (加入自噬抑制剂3-MA的CAFs) 自噬标志蛋白beclin 1和p62的表达水平. (3) 明确CAFs自噬对MDA-MB-231和BT-549细胞迁移的作用:采用Transwell小室模型观察不同培养条件[分4组, 包括空白组 (含10％FBS的DMEM培养基, 即普通培养基) 、NFs组、CAFs组和CAFs+3-MA组]下MDA-MB-231和BT-549的细胞迁移数. (4) 明确CAFs自噬对MDA-MB-231和BT-549细胞发生上皮-间质转化 (EMT) 的影响:采用Western blot检测3种培养条件[普通培养基 (空白组) 、CAFs条件培养基 (CAFs-CM组) 和加入3-MA的CAFs条件培养基 (CAFs+3-MA-CM组) ]下MDA-MB-231和BT-549 EMT相关蛋白 (E-cadherin, N-cadherin, vimentin) 的表达情况.正态分布的数据用xˉ±表示, 偏态分布的数据用M (P25-P75) 表示.2组间α-SMA表达水平比较采用两独立样本非参数秩和检验, α-SMA阳性细胞比例比较采用两独立样本t检验, 各组间细胞自噬标志蛋白表达水平、细胞迁移数和EMT相关蛋白表达水平的比较均采用单因素方差分析.结果 (1) 荧光显微镜下观察发现, 每视野下CAFs组α-SMA阳性细胞比例显著高于NFs组[ (81.11±3.95) ％比 (5.11±2.37) ％, t=49.49, P＜0.001); Western blot检测表明, CAFs组α-SMA表达水平也高于NFs组[M (P25～P75):0.98 (0.95～0.98) 比0.48 (0.47～0.48), Z=2.023, P=0.043]. (2) CAFs组、NFs组和CAFs+3-MA组细胞beclin 1表达水平分别为0.99±0.03、0.73±0.04和0.26±0.02, p62表达水平分别为0.75±0.02、0.98±0.03和0.97±0.01, 组间比较, 差异均有统计学意义 (F=546.188、136.353, P均＜0.001), 其中, CAFs组的beclin 1表达水平显著高于CAFs+3-MA组 (P＜0.001), p62表达水平明显低于CAFs+3-MA组 (P＜0.001) . (3) CAFs组、NFs组、CAFs+3-MA组以及空白组MDA-MB-231细胞迁移数分别为 (41.67±2.78) 、 (23.33±2.18) 、 (22.00±1.76) 、 (18.00±2.12) 个, 4组比较, 差异有统计学意义 (F=198.374, P＜0.001);同样, 4组BT-549细胞的迁移数分别为 (35.22±1.97) 、 (22.00±2.60) 、 (25.11±2.15) 、 (15.22±2.00) 个, 组间比较, 差异也有统计学意义 (F=129.424, P＜0.001), 并且, CAFs组的MDA-MB-231和BT-549细胞迁移数均明显高于其余3组 (P＜0.050) . (4) MDA-MB-231细胞分别与普通培养基 (空白组) 、CAFs条件培养基 (CAFs-CM组) 和加入3-MA的CAFs条件培养基 (CAFs+3-MA-CM组) 共培养后, 3组细胞的E-cadherin表达水平分别为0.79±0.03、0.54±0.02和0.87±0.04, N-cadherin表达水平分别为0.59±0.02、1.00±0.02和0.93±0.02, vimentin表达水平分别为0.62±0.03、1.01±0.01和0.89±0.09, 组间比较, 差异也均有统计学意义 (F=139.286、604.905、43.884, P均＜0.001) .同样, BT-549细胞分别与以上3种培养基共培养后, 3组细胞的E-cadherin表达水平分别为1.01±0.03、0.63±0.03和0.98±0.03, N-cadherin表达水平分别为0.58±0.01、0.94±0.04和0.95±0.03, vimentin表达水平分别为0.61±0.01、0.98±0.03和0.75±0.02, 组间比较, 差异也均有统计学意义 (F=210.102、184.477、217.659, P均＜0.001) .结论 CAFs可促进TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549的迁移和EMT过程, 且该作用与CAFs自噬相关.

关键词：乳腺肿瘤、成纤维细胞、自噬

所属期刊栏目：13

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：广东省自然科学基金;南方医科大学科研启动基金

在线出版日期：2019-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：8-15