短发夹RNA沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因表达对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭能力的影响

摘要：

目的 构建以促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)为靶基因的短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,并探讨PRL-3-shRNA表达载体对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 构建PRL-3基因特异性shRNA表达载体,使用脂质体法将PRI-3-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot分别检测转染后MCF-7细胞中PRL-3基因mRNA和蛋白的表达;运用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测转染后MCF-7 细胞的增殖水平,用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况;采用Transwell小室法检测细胞侵袭力变化.计量资料采用单因素方差分析或重复测量方差分析.结果 酶切鉴定和测序分析证实PRL-3-shRNA表达载体成功构建.转染成功后,shRNA-1～3组PRL-3基因mRNA表达分别为(0.31±0.27)、(0.15±0.14)和(0.31±0.03),与空白组和阴性组(1.00±0.00、0.98±0.18)相比,差异有统计学意义(P<0.05).PRL-3shRNA-2组PRL-3蛋白的表达量明显低于阴性组和空白组(0.50±0.02比0.91±0.03和0.89±0.02,P<0.05);PRL-3-shRNA-2转染入MCF-7细胞后能明显降低其增殖水平(P<0.05);PRL-3-shRNA-2组凋亡率明显高于空白组和阴性组[(8.37±1.85)%比(1.60±1.58)%和(0.16±0.05)%,P<0.05];Trarmwell小室侵袭实验显示,PRL-3-shRNA-2组穿膜细胞数明显低于阴性组和空白组(P<0.05).结论 沉默PRL-3基因表达可抑制MCF-7细胞的增殖,促进凋亡,抑制其侵袭能力.

关键词：乳腺肿瘤、促肝细胞再生磷酸酶-3、短发夹状小干扰RNA、基因治疗

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分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：广东省科技计划资助项目2008B030301345

在线出版日期：2011-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：313-322