应用原代培养的小鼠肾小管上皮细胞建立体外模拟缺血再灌注损伤模型

摘要：

目的 原代培养小鼠肾小管上皮细胞(TEC),建立小鼠TEC体外模拟缺血再灌注(IR)的模型.方法 切取C57BL/6J小鼠肾脏外侧髓质,用Ⅰ型胶原酶消化后进行原代培养,采用免疫组织化学法进行鉴定.将贴壁生长的TEC用石蜡油覆盖模拟缺血过程,60 min后更换全培养基模拟再灌注过程.在更换培养基后不同时间点收集细胞,抽提RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6 mRNA的表达；在再灌注后24 h收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附试验检测各细胞因子蛋白的表达.结果 经过原代培养的小鼠TEC呈上皮细胞特有的“铺路石”状,细胞胞浆内高表达细胞骨架蛋白18.与对照组相比,IR组TEC在更换培养基后TNF-α、IL-1β和IL-6的转录水平均明显增高.TNF-α mRNA表达量在更换培养基后0.5h达峰,约为对照组的(24.45±6.51)倍(P＜0.01),随后逐渐下降；在更换培养基后IL-1β mRNA表达量呈逐渐上升的趋势,更换培养基后6h约为对照组的(15.27±4.29)倍(P＜0.05)；IL-6 mRNA表达量在更换培养基后3h达峰,约为对照组的(11.19±4.55)倍(P＜0.01).与对照组相比,IR组TEC在更换培养基后24 h,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白表达均明显增高.结论 小鼠肾脏外侧髓质经分离、消化后可获得高纯度的原代培养TEC；应用石蜡油可以成功建立小鼠TEC体外模拟IR的模型.

关键词：小鼠、肾小管、上皮细胞、细胞培养技术、缺血、再灌注

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分类号：R587.102(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金81070596;30872581;上海市科委基础重点项目09JC1405500

在线出版日期：2012-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：426-429