小鼠真皮成纤维细胞成脂分化对金黄色葡萄球菌感染的抵抗效应及机制研究
目的:探讨小鼠真皮成纤维细胞（MdFB）成脂分化过程抗金黄色葡萄球菌感染的效应及机制。方法:从新生C57BL/6小鼠提取MdFB，采用脂肪诱导分化培养基培养48 h诱导成脂分化，之后采用分化维持培养基继续培养。采用实时荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）检测MdFB成脂分化0 ~ 6 d抗菌肽蛋白（CAMP）基因mRNA相对表达水平；采用Western印迹法检测MdFB成脂分化培养基上清液CAMP蛋白表达趋势。取12孔板每孔加入1 ml 1 × 10
6 CFU MdFB，再加入1 × 10
7 CFU灭活金黄色葡萄球菌悬液或磷酸盐缓冲液（对照）刺激，分别采用成脂分化培养基或普通培养基培养4 h，分为共同作用组、分化对照组、金葡菌刺激组、对照组，收集细胞，采用Western印迹及RT-PCR检测CAMP蛋白及mRNA表达。采用成脂分化5 d的MdFB培养基上清液培养金黄色葡萄球菌（5 × 10
4 CFU/ml），在10 ~ 24 h内每2小时评估生长活性，以普通培养基培养的MdFB上清液（正常对照组）和不含细胞的培养基上清液（阴性对照组）作为对照。采用非配对
t检验或方差分析比较组间差异。
结果:成脂分化后0、1、2、4、6 d时CAMP mRNA相对表达差异（1.14 ± 0.74、68.04 ± 12.72、683.12 ± 38.06、1 390.68 ± 226.21、454.57 ± 204.12）有统计学意义（
F = 50.08，
P < 0.001），1、2、4、6 d时均高于0 d时（
t = 9.09、31.03、10.63、3.85，均
P < 0.05），CAMP基因的表达呈先升后降趋势。培养基上清液中CAMP蛋白含量在第2 ~ 5天达到较高水平，之后下降。对照组、金葡菌刺激组、分化对照组、共同作用组MdFB CAMP蛋白（0.433 ± 0.176、0.574 ± 0.176、1.007 ± 0.176、1.217 ± 0.176）及mRNA相对表达（0.08 ± 0.02、0.38 ± 0.10、0.49 ± 0.11、0.80 ± 0.03）差异均有统计学意义（
F = 46.79、43.25，均
P < 0.05），共同作用组蛋白及mRNA相对表达均高于分化对照组、金葡菌刺激组、对照组（
P < 0.05）。成脂分化组细胞上清液培养金黄色葡萄球菌10 h时生长活性（0.053 ± 0.015）均低于正常对照组、阴性对照组（0.109 ± 0.015、0.106 ± 0.015，
t = 11.30、13.26，均
P < 0.05），在培养10 ~ 24 h的余时间点成脂分化组生长活性均低于正常对照组及阴性对照组（均
P < 0.05）。
结论:MdFB在成脂分化过程中向胞外分泌抗菌肽蛋白，可抑制金黄色葡萄球菌的增殖。
成纤维细胞、小鼠，近交C57BL、金黄色葡萄球菌、成脂分化、固有免疫、抗菌肽蛋白
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国家自然科学基金82173432、82103749;中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目2017-I2M-1-017、2021-I2M-1-059;江苏省自然科学基金BK20190144;南京市国家级临床医学中心培育计划项目2019060001;National Natural Science Foundation of China82173432, 82103749;CAMS Innovation Fund for Medical Sciences2017-I2M-1-017, 2021-I2M-1-059;Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20190144;The Nanjing Incubation Program for National Clinical Research Center2019060001
2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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