白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究

摘要：

目的:探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）焦亡的影响。方法:通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数（MOI）= 50，下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡；将BMDM分为对照组、白念珠菌组，分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h，实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-18 mRNA表达水平，Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后，酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型（WT）BMDM及GSDMD敲除（KO）BMDM 15 min，采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率；诱导6 h后，采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶（LDH）释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β +白念珠菌组，用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对
t检验、Kruskal-Wallis检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。
结果:白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象，证实焦亡发生；与对照组相比，白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高（
t = 13.02、17.51，
P =或<0.001），而IL-18 mRNA表达水平无明显变化（
P = 0.486），且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高（
H = 12.90，
P = 0.012），而IL-18的分泌水平无明显变化（
F = 0.48，
P = 0.753），且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组（
F = 24.22，
P = 0.008）。白念珠菌体外诱导15 min后，GSDMD KO BMDM[（50.3 ± 1.10）%]对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM[（58.53 ± 1.19）%，
t = 5.09，
P = 0.007]；白念珠菌体外诱导6 h后，流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率（38.40% ± 0.50%）高于WT组BMDM（34.37% ± 0.52%），
t = 4.72，
P = 0.009；LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率（22.52% ± 0.18%）高于WT BMDM（12.48% ± 0.15%），
t = 42.36，
P<0.001；IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低（均
P<0.001）。
结论:白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡，焦亡的发生可促进IL-1β释放，并通过提高巨噬细胞的免疫活性，降低巨噬细胞死亡率。

关键词：白色念珠菌、巨噬细胞、焦亡、白细胞介素1β、白细胞介素18、Gasdermin D

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资助基金：国家自然科学基金82103749、82173432;江苏省自然科学基金BK20190144;南京市国家级临床医学中心培育计划项目2019060001;National Natural Science Foundation of China82103749, 82173432;Natural Science Foundation of Jiangsu ProvinceBK20190144;The Nanjing Incubation Program for National Clinical Research Center2019060001

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：301-308