目的:研究葡萄糖转运体1(Glut-1)抑制剂白藜芦醇(RSV)对婴儿血管瘤内皮细胞(HemEC)活性的影响。方法:收集4例增殖期与4例消退期婴儿血管瘤(IH)组织,采用免疫组化观察Glut-1的表达。从4例增殖期IH组织中提取原代HemEC,采用qPCR与Western印迹检测HemEC与对照脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Glut-1 mRNA与蛋白的表达水平。体外培养HemEC,分别采用0(对照组)、50、100、200、400、800 μmol/L RSV干预24 h,采用CCK-8法检测各组HemEC增殖能力,计算半抑制浓度(IC50)。分别采用Transwell实验、流式细胞仪观察HemEC迁移能力及凋亡水平。组间比较采用
t检验或方差分析,组间多重比较采用LSD-
t检验。
结果:免疫组化显示,增殖期及消退期IH组织中血管内皮细胞Glut-1均阳性,但增殖期表达丰富,消退期表达明显降低。HemEC中Glut-1 mRNA及蛋白表达水平(1.793 ± 0.041、1.959 ± 0.144)均高于HUVEC(0.820 ± 0.073、0.648 ± 0.046,
t = 16.35、12.28,均
P < 0.001)。采用Glut-1抑制剂RSV干预HemEC后,0 ~ 800 μmol/L组HemEC增殖活性差异有统计学意义(
F = 1 043.00,
P < 0.001),所有RSV干预组HemEC的增殖活性均低于对照组(
P < 0.05)。GraphPad Prism 8计算得出RSV IC50浓度为150 μmol/L,Transwell实验与流式细胞仪检测显示,150 μmol/L RSV干预组HemEC组细胞迁移数(61 ± 5)低于对照组(150 ± 6,
t = 15.11,
P < 0.001),凋亡率(13.01% ± 0.45%)高于对照组(3.93% ± 0.68%,
t = 19.34,
P < 0.001)。
结论:糖酵解关键酶Glut-1在IH增殖期组织与HemEC中高表达,RSV干预可以抑制HemEC增殖及迁移能力并促进其凋亡。
血管瘤、人脐静脉内皮细胞、葡萄糖转运体1型、细胞增殖、细胞凋亡、白藜芦醇
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国家自然科学基金81401606、81400862;四川省科技厅重点研发项目2019YFS0322;四川大学优秀青年学者基金2015SU04A15;四川大学华西医院学科卓越发展1·3·5工程临床研究孵化项目2019HXFH056、2020HXFH048、ZYJC21060;National Natural Science Foundation of China81401606, 81400862;Key Project in the Science & Technology Program of Sichuan Province2019YFS0322;Science Foundation for Excellent Youth Scholars of Sichuan University2015SU04A15;The 1·3·5 Project for Disciplines of Excellence-Clinical Research Incubation Project, West China Hospital of Sichuan University2019HXFH056, 2020HXFH048, ZYJC21060