微小RNA-181b-5p对皮肤黑素瘤细胞株增殖和侵袭的作用及机制研究

摘要：

目的:探讨微小RNA（miRNA）-181b-5p是否通过靶向普列克底物蛋白（PLEK）抑制皮肤黑素瘤（CM）细胞的增殖及侵袭能力。方法:生物信息学分析CM核心基因；双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-181b-5p和PLEK的靶向结合。采用RNA oligo和siRNA分别调控A375细胞miRNA-181b-5p和PLEK的表达，具体分组为：模拟物阴性对照组、miRNA-181b-5p模拟物组、抑制剂阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂组、PLEK siRNA组、siRNA阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组以及miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA3共转染组。上述各组用相应试剂处理细胞48 h后，采用qPCR检测A375细胞中miRNA-181b-5p和PLEK mRNA的表达，Western印迹检测PLEK蛋白的表达，Transwell小室侵袭实验检测A375细胞的侵袭能力；继续培养24 ~ 96 h后，CCK8实验检测A375细胞增殖能力。结果:PLEK为CM的核心基因，CM原位癌组织较癌旁组织高表达PLEK（
P = 0.031），转移组织较原位癌组织高表达PLEK（
P = 0.001）。与人表皮黑素细胞HEMa-LP相比，A375细胞高表达PLEK mRNA（3.884 ± 0.156比0.997 ± 0.010，
t = 18.48，
P < 0.001）及PLEK蛋白（2.840 ± 0.301比1.029 ± 0.094，
t = 5.47，
P = 0.005），低表达miRNA-181b-5p（0.333 ± 0.042比0.967 ± 0.069，
t = 7.83，
P = 0.001）。双荧光素酶报告基因实验显示，miRNA-181b-5p和PLEK靶向结合。与模拟物阴性对照相比，miRNA-181b-5p模拟物转染后A375细胞的存活率显著降低（48 h，
t = 7.96，
P = 0.015；72 h，
t = 7.50，
P = 0.002；96 h，
t = 7.96，
P = 0.001），侵袭能力也显著降低（
t = 5.07，
P = 0.007）；相反miRNA-181b-5p抑制剂组A375细胞存活率高于抑制剂阴性对照组（24 h，
t =5.38，
P = 0.013；48 h，
t = 5.36，
P = 0.013；72 h，
t =7.63，
P = 0.005；96 h，
t =5.99，
P = 0.004），侵袭能力也高于抑制剂阴性对照组（
t = 7.24，
P = 0.002）；与对照siRNA组相比，PLEK siRNA转染后A375细胞的增殖能力降低（48、72、96 h时，
P值分别为0.015、0.011、0.001），侵袭能力也降低（
t = 4.93，
P = 0.008）；与miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组相比，miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA共转染组A375细胞的增殖率明显降低（24、48、72、96 h时，
P值分别为0.042、0.042、0.037、0.017），侵袭能力也明显降低（
t = 8.52，
P = 0.001）。
结论:miRNA-181b-5p抑制A375细胞增殖和侵袭能力，其机制涉及靶向下调PLEK的表达。

关键词：黑色素瘤，实验性、微RNAs、细胞增殖、肿瘤侵润、miR-181b-5p、普列克底物蛋白

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资助基金：广西壮族自治区卫计委自筹经费科研项目Z20170464;广西壮族自治区卫健委自筹经费科研项目Z20200131;桂林医学院中青年教职工科研能力提升项目2018glmcy050;Guangxi Zhuang Autonomous Region Health and Family Planning Commission Self-funded Research ProjectZ20170464;Guangxi Zhuang Autonomous Region Health Commission Self-funded Research ProjectZ20200131;Young and Middle-aged Faculty Research Ability Enhancement Project of Guilin Medical College2018glmcy050

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：588-595