表皮生长因子受体shRNA联合西罗莫司对Colo-16细胞体外增殖、凋亡的研究
目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）shRNA联合西罗莫司对人皮肤鳞状细胞癌Colo-16细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:Colo-16细胞分为5组：正常细胞组（常规培养+磷酸盐缓冲液）、阴性对照组（转染shRNA-NC质粒+磷酸盐缓冲液）、西罗莫司组（常规培养+西罗莫司）、EGFR shRNA组（转染EGFR shRNA质粒）、联合组（转染EGFR shRNA质粒+西罗莫司）。采用MTT法检测各组24 ~ 96 h各时间点细胞增殖活性，流式细胞仪分析处理48 h后各组细胞凋亡情况。RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达，Western印迹法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase3、cleaved caspase9、Bcl-2、Bax、细胞增殖相关蛋白p-mTOR、p-AKT、p-P70S6K及细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两多重比较采用SNK-
q检验。
结果:MTT检测显示，24 ~ 96 h西罗莫司组、EGFR shRNA组及联合组Colo-16细胞增殖活性均显著低于正常细胞组（均
P < 0.05），且联合组细胞增殖活性显著低于西罗莫司组和EGFR shRNA组（均
P < 0.001），正常细胞组与阴性对照组各时间点细胞增殖活性差异均无统计学意义（均
P > 0.05）。流式细胞实验结果显示，西罗莫司组、EGFR shRNA组和联合组细胞凋亡率分别为9.52% ± 0.25%、12.65% ± 0.23%、19.81% ± 0.31%，均显著高于正常细胞组（3.33% ± 0.18%，
q值分别为60.07、78.08、122.81，均
P < 0.001）和阴性对照组（3.42% ± 0.19%，
q值分别为59.90、77.91、122.64，均
P < 0.001），且联合组凋亡率最高。RT-PCR和Western印迹法显示，与正常细胞组相比，西罗莫司组、EGFR shRNA组和联合组Bcl-2 mRNA及cyclin D1、p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K、Bcl-2蛋白表达均显著降低（均
P < 0.05），Bax mRNA及cleaved caspase3、cleaved caspase9、Bax蛋白表达均显著增加（均
P < 0.05），其中联合组Bcl-2 mRNA及cyclin D1、p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K、Bcl-2蛋白表达显著低于西罗莫司组及EGFR shRNA组（均
P < 0.05），而Bax mRNA及cleaved caspase3、cleaved caspase9、Bax蛋白表达均显著高于西罗莫司组及EGFR shRNA组（均
P < 0.01）。
结论:EGFR shRNA联合西罗莫司在抑制Colo-16细胞增殖、促进其凋亡方面有协同增效的作用，其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR通路有关。
癌，鳞状细胞、受体，表皮生长因子、RNA干扰、西罗莫司、细胞增殖、细胞凋亡
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2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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