Spink5基因条件性敲除小鼠模型的构建及表型分析
目的:构建Spink5基因条件性敲除小鼠模型并鉴定其表型。方法:采用CRISPR/Cas9技术构建基因型为Mb1
cre/+Spink5
floxp/floxp的B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠(敲除组),以基因型为Mb1
+/+Spink5
floxp/floxp的小鼠为对照组。提取小鼠脾脏单个核细胞并经流式细胞荧光技术分选B淋巴细胞及非B淋巴细胞,然后分别进行基因型鉴定及淋巴上皮Kazal型抑制物(LEKTI)蛋白表达的测定。切取小鼠皮肤行HE染色,测量表皮厚度,免疫荧光染色测定小鼠皮肤LEKTI蛋白荧光强度。组间比较采用配对
t检验或两独立样本
t检验。
结果:基因型鉴定结果表明,成功构建稳定的B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠模型。Western印迹显示,条件性敲除小鼠B淋巴细胞中LEKTI蛋白相对表达量为0.01 ± 0.02,显著低于非B淋巴细胞(0.66 ± 0.11,
t = 9.99,
P < 0.001)及对照组小鼠B淋巴细胞(1.08 ± 0.13,
t = 13.78,
P < 0.001)。39只敲除组小鼠中,4只出现皮肤干燥、散在鳞屑性肥厚型斑丘疹。敲除组皮损部位表皮厚度为(90.42 ± 21.31)μm,显著高于其非皮损部位[(29.71 ± 3.63)μm,
t = 5.05,
P = 0.002]及对照组表皮[(12.42 ± 2.21)μm,
t = 6.74,
P < 0.001]。免疫荧光检测显示,敲除组皮损处LEKTI蛋白荧光强度为46.21 ± 1.21,非皮损处为46.62 ± 2.13,与对照组(47.69 ± 1.71)差异均无统计学意义(
P > 0.05)。
结论:成功构建了B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠模型,为进一步探究Netherton综合征皮肤屏障缺陷伴免疫功能异常的机制提供研究基础。
Netherton综合征、小鼠,基因敲除、B淋巴细胞、Spink5基因、LEKTI蛋白、皮肤屏障受损
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国家自然科学基金81703124、81801637;National Natural Science Foundation of China81703124, 81801637
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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