nicastrin基因沉默的斑马鱼模型构建及其色素异常机制的初步研究
目的:探讨nicastrin(nct)基因对斑马鱼黑素细胞生物学功能的影响。方法:利用吗啉代寡核苷酸(MO)技术针对斑马鱼nct基因mRNA设计nct-MO序列,同时设计对照MO序列(ctrl-MO),并构建5′端为MO靶序列的增强绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA,通过显微注射的方式将nct-MO或ctrl-MO与EGFP mRNA共注射入斑马鱼胚胎中,验证nct-MO的沉默效率,观察其表型变化。以野生型斑马鱼作为空白对照组,实时荧光定量PCR检测黑素合成notch信号通路相关基因mitfa、tyr、tyrp1a、tyrp1b、dct、pmela、notch1a、notch1b、hey1 mRNA表达水平的变化。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-
t检验。
结果:斑马鱼受精后8 h,ctrl-MO+EGFP mRNA组斑马鱼胚胎中均有绿色荧光表达,而nct-MO+EGFP mRNA组及空白对照组胚胎均未见绿色荧光。受精后48 h,nct-MO组幼鱼尾部色素沉着区面积占比(0.169 ± 0.083)低于ctrl-MO组(0.258 ± 0.042,
t=3.202,
P=0.005),且nct-MO组色素分布紊乱。实时荧光定量PCR显示,nct-MO组、ctrl-MO组、空白对照组间pmela、tyrp1a、hey1基因mRNA相对表达量差异有统计学意义(均
P < 0.05),mitfa、tyr、tyrp1b、dct、notch1a、notch1b mRNA相对表达差异无统计学意义(均
P > 0.05);nct-MO组pmela、tyrp1a相对表达水平(0.708 ± 0.028、0.558 ± 0.136)低于ctrl-MO组(1.023 ± 0.142、1.016 ± 0.134,均
P < 0.05)。
结论:nct基因可能通过调控斑马鱼黑素合成影响黑素细胞生物学功能。
色素沉着异常、化脓性汗腺炎、Nicastrin基因、γ分泌酶、斑马鱼模型
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国家自然科学基金81472872;中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目2016-I2M-1-002;National Natural Science Foundation of China81472872;CAMS Innovation Fund for Medical Sciences2016-I2M-1-002
2023-05-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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