泛素结合酶2S参与调控黑素瘤行为机制的生物信息学分析
目的:揭示黑素瘤中可能与泛素结合酶2S（UBE2S）存在相互作用的基因，探讨UBE2S参与调控黑素瘤细胞生物学行为的分子机制。方法:将A375黑素瘤细胞分为基因敲降组和阴性对照组，分别用含LV-UBE2S-RNAi（14011-1）的慢病毒和CON053慢病毒转染细胞构建UBE2S敲降细胞株和阴性对照细胞株。提取两组细胞株RNA，并将其纯化及片段化，与芯片探针杂交洗染获取芯片数据。采用Ingenuity路径分析软件对获得的差异表达基因的芯片数据进行进一步解析，鉴定可能与UBE2S存在相互作用的基因，应用免疫印迹法对UBE2S调控的下游分子进行验证。采用双尾
t检验筛选差异基因。
结果:在基因敲降组与阴性对照组之间共筛选出差异倍数绝对值> 2且
P < 0.05的差异基因512个，其中上调基因247个，下调基因265个。差异基因信息的Ingenuity路径分析结果证实，干扰素信号和肝X受体/视网膜X受体活化通路显著激活，真核起始因子2和核因子κB信号通路则被抑制。预测上游调控因子中IFNA2为强烈激活，核因子κB（复合物）被抑制。综合以上生物信息学分析结果，推测黑素瘤细胞UBE2S基因可通过调节IFITM1、STAT1、ISG15和TNFRSF11B基因的表达发挥功能。免疫印迹显示，A375细胞UBE2S基因敲降前后，IFITM1蛋白均未表达，敲降后ISG15蛋白表达上调19.94倍，STAT1蛋白表达上调1.47倍，TNFRSF11B蛋白表达下调79.1%。
结论:UBE2S可能通过与STAT1、ISG15和TNFRSF11B的相互作用，共同调控黑素瘤肿瘤细胞生物学行为。
泛素缀合酶类、痣和黑素瘤、寡核苷酸序列分析、STAT1转录因子、泛素结合酶2S、ISG15基因、TNFRSF11B基因
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浙江省公益技术应用研究计划项目2016C33206;浙江省医药卫生科技计划项目2014KYB200;浙江省卫生健康科技计划项目2021KY902;杭州市卫生科技计划项目0020190705;Zhejiang Public Welfare Technology Application Research Project2016C33206;Medical and Health Science and Technology Planning Project of Zhejiang Province2014KYB200;Health Science and Technology Planning Program of Zhejiang Province2021KY902;Medical and Health Technology Project of Hangzhou0020190705
2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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