本维莫德对HaCaT细胞增殖、炎症因子分泌及皮肤屏障因子产生的影响
目的:研究本维莫德对人角质形成细胞增殖、炎症细胞因子分泌、皮肤屏障蛋白合成以及信号转导与转录激活蛋白1（STAT1）磷酸化的影响。方法:体外培养HaCaT细胞，采用0.1 ~ 1 000 μmol/L本维莫德处理24 h，用CCK8法检测细胞增殖。部分HaCaT细胞分为6组，对照组仅加入DMEM培养基，刺激剂组加入10 μg/L肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（IFN-γ），本维莫德组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ以及终浓度为1 ~ 10或1 ~ 100 μmol/L本维莫德，AhR拮抗剂组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ、10或100 μmol/L本维莫德以及10 nmol/L StemRegenin1（SR1），处理24 h后，酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL）-4、IL-10、IL-22和胸腺活化调节趋化因子（TARC）的水平，RT-PCR检测HaCaT细胞芳香烃受体（AhR）、细胞色素P450 1A（CYP1A1）、聚丝蛋白、内披蛋白、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）和TARC mRNA的表达水平，Western印迹法检测聚丝蛋白、内披蛋白、TSLP和STAT1及磷酸化STAT1（p-STAT1）的蛋白表达水平，免疫荧光检测本维莫德对HaCaT细胞中AhR核转位的影响。计量资料采用非配对Student
t检验和单因素方差分析进行比较，Spearman检验分析各指标间的关系。
结果:0.1、1、10、100、1 000 μmol/L本维莫德干预HaCaT细胞24 h后，细胞存活率分别为（90.2 ± 2.4）%、（85.4 ± 11.9）%、（52.8 ± 14.0）%、（39.4 ± 7.9）%、（27.5 ± 3.4）%，各组间差异有统计学意义（
F = 162.5，
P < 0.001），50%抑制浓度为48.54 μmol/L。与刺激剂组相比，10和100 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞分泌的IL-10水平上升（
F = 16.110，
P < 0.001），但100 μmol/L组IL-22（
F = 6.884，
P < 0.001）和10、100 μmol/L组TARC水平（
F = 7.052，
P < 0.001）显著下降。与刺激剂组相比，1和10 μmol/L本维莫德组CYP1A1 mRNA表达（
P = 0.004）和10 μmol/L本维莫德组FLG mRNA表达（
P = 0.040）水平显著增高，而10 μmol/L组TARC mRNA和10 μmol/L组TSLP mRNA表达显著降低（均
P < 0.01），而刺激剂组和本维莫德组间AhR mRNA的表达差异无统计学意义（
P = 0.193）。与刺激剂组相比，10 μmol/L本维莫德组聚丝蛋白（
P = 0.020）和1、10 μmol/L本维莫德组内披蛋白表达水平（
P < 0.001）显著上升，而10 μmol/L TSLP蛋白表达水平显著下降（
P < 0.001），1和10 μmol/L本维莫德组p-STAT1蛋白表达水平显著下降（
P < 0.001）。与100 μmol/L本维莫德组相比，AhR拮抗剂组IL-10分泌水平显著下降（
t = 4.794，
P = 0.003），TSLP mRNA的表达显著上升（
t = 3.769，
P = 0.005）；与10 μmol/L本维莫德组相比，AhR拮抗剂组IVL蛋白表达显著下降（
t = 5.117，
P = 0.002），TSLP蛋白表达显著上升（
t = 3.117，
P = 0.043），p-STAT1蛋白表达无明显变化（
t = 1.400，
P = 0.719）。免疫荧光染色显示对照组和1 μmol/L本维莫德组中AhR绿色荧光主要表达于HaCaT细胞胞质中，细胞核中基本无荧光表达；而在10 μmol/L和20 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞的细胞质和细胞核均可见高密度绿色荧光。
结论:本维莫德可通过活化AhR信号通路抑制HaCaT细胞增殖，调节炎症因子分泌，上调皮肤屏障相关因子的产生和抑制STAT1磷酸化。
皮炎，特应性、角蛋白细胞、细胞增殖、细胞因子类、本维莫德、芳香烃受体
53
北京大学人民医院研究与发展基金RDY2019-24;Peking University People′s Hospital Research and Development FoundationRDY2019-24
2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
984-991
