人脂肪干细胞源外泌体对HaCaT细胞损伤修复及迁移功能影响的初步实验研究

摘要：

目的 初步探究人脂肪干细胞源外泌体对表皮细胞迁移功能的影响.方法 从正常人抽脂手术中获取的脂肪组织分离培养脂肪干细胞,采用超速离心和超滤结合的改良法分离收集细胞上清液中的外泌体,采用透射电镜、动态光散射法以及Western印迹法鉴定分离出的外泌体.采用0、50、100、200、250、300、400、500、600、800 μmol/L H2O2分别作用HaCaT细胞1h,CCK8法检测H2O2对HaCaT细胞存活率的影响.将HaCaT细胞分为正常组(无预处理)和损伤组(用100 μmol/L H2O2损伤预处理0.5 h),再将两组分别分为对照组和治疗组,治疗组与外泌体共培养,对照组不与外泌体共培养.用共聚焦荧光显微镜观察PKH26荧光标记的外泌体是否能被细胞吞噬,用划痕实验观察HaCaT细胞修复率,用Transwell实验评估细胞迁移能力.多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD检验,相关性检验采用Spearman检验.结果 透射电镜观察显示,分离所得的脂肪干细胞源外泌体是直径60～ 80 nm的茶托样纳米囊泡,而动态光散射法测量显示,分离的外泌体纯度为65.88％,表达CD63、Alix和TSG101,具有外泌体的基本特征.CCK8法显示,0～800 μmol/LH2O2处理HaCaT细胞1h后细胞存活率呈逐渐降低趋势,H2O2浓度与HaCaT细胞存活率呈负相关(r=-0.91,P＜ 0.01).共聚焦荧光显微镜观察,分离的外泌体能被损伤后的HaCaT细胞摄入.划痕实验显示,正常对照组、正常治疗组、损伤对照组、损伤治疗组HaCaT细胞12h划痕面积修复率分别是40.26％±0.64％、69.57％±0.69％、32.28％±0.31％、69.62％±1.68％,损伤治疗组显著高于损伤对照组(t=37.33,P＜0.01).Transwell实验结果显示,4组10倍视野下迁移细胞数分别是20.85±4.84、44.8±5.24、14.95±2.58、40.05±7.66,损伤治疗组大于损伤对照组(t=25.10,P＜0.01).结论 人脂肪干细胞源外泌体具有促进氧化应激损伤的HaCaT细胞迁移的能力.

关键词：干细胞、皮下脂肪、外泌体、角蛋白细胞、伤口愈合、细胞迁移分析

所属期刊栏目：52

资助基金：广东省医学科研基金A2018555;深圳市科技计划资助项目JCYJ20170818100526471Medical Scientific Research Foundation of Guangdong Province of ChinaA2018555;Shenzhen Science and Technology Plan ProjectJCYJ20170818100526471

在线出版日期：2019-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：616-623