沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1抑制细胞凋亡机制的初步研究

摘要：

目的 探讨pORF5质粒蛋白抗凋亡分子机制,为进一步阐明沙眼衣原体致病机制提供实验依据.方法 将HeLa细胞分为两组,一组用凋亡诱导剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)刺激30 min,另一组经pORF5质粒蛋白预处理18h后,再用CCCP刺激30 min.然后,Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达水平;JC-1荧光探针检测HeLa细胞线粒体膜电位变化;间接免疫荧光观察细胞色素c释放情况.为了分析高迁移率族蛋白1 (HMGB1)是否参与pORF5质粒蛋白的抗凋亡作用,分别用HMGB1 shRNA和对照RNA稳定转染HeLa细胞,再用pORF5质粒蛋白与CCCP共刺激两种细胞后,测定Bcl-2、Bax和活化的caspase-3蛋白的表达以及细胞色素c的释放情况.两组间比较采用配对样本t检验.结果 pORF5质粒蛋白能拮抗CCCP诱导的线粒体膜电位的下降,CCCP单独处理组Hela细胞红/绿荧光强度比率为0.4±0.1,显著低于pORF5与CCCP共处理组(1.7±0.3,t=6.95,P＜0.01).与对照组相比,pORF5与CCCP共处理组HeLa细胞Bcl-2蛋白表达水平增加(5.3±0.6)倍(t=8.62,P＜ 0.01),而Bax和活化的caspase-3平均表达水平分别降低79％±10％(t=9.23,P＜0.01)和75％±8％(t=4.26,P＜0.05).与对照RNA转染组相比,HMGB1 shRNA转染组HeLa细胞线粒体膜电位下降(t=11.23,P＜ 0.01),细胞色素c释放增加,Bcl-2的表达水平降低(t=7.19,P＜0.05),而Bax的表达水平增加(t=13.06,P＜0.01).结论 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过HMGB1阻断线粒体凋亡途径发挥抗凋亡作用.

关键词：沙眼衣原体、细胞凋亡、原癌基因蛋白质c-bcl-2、Bcl-2相关X蛋白质、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、高迁移率族蛋白质1、pORF5质粒蛋白

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在线出版日期：2019-09-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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页码：548-553