体外低浓度过氧化氢对人黑素细胞自噬水平的影响及自噬相关lncRNA的筛选

摘要：

目的 研究低浓度过氧化氢(H2O2)处理对人黑素细胞黏附功能及自噬水平的影响,并筛选自噬相关lncRNA.方法 从健康男性包皮环切术后获得的皮肤组织中分离、培养黑素细胞.对数生长期黑素细胞分为对照组(无H2O2处理)、H2O2组(400μmol/L H2O2处理)和H2O2+NAC组(4 mmol/L NAC预处理细胞2h,然后加入400 μmol/L H2O2).处理5d后,用免疫荧光检测上述各组黑素细胞E-钙黏素、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及p62表达,透射电镜观察细胞结构及自噬体,Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,运用基因芯片技术筛选自噬相关lncRNA.采用Graphpad Prism 6软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,并用Tukey检验进行两两间的多重比较.结果 共聚焦显微镜下,与对照组和H2O2+ NAC组相比,H2O2组黑素细胞E-钙黏素及LC3荧光强度均明显下降,而p62荧光强度增高,且电镜下H2O2组黑素细胞内自噬体数量减少.Western印迹结果显示,H2O2处理组黑素细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值(0.604±0.012)显著低于对照组(1.200±0.081,q=7.718,P＜0.01)及H2O2+NAC组(1.017±0.062,q=5.076,P＜0.05),同时其p62/β肌动蛋白值(0.881±0.079)显著高于对照组(0.456±0.121,q=4.847,P＜0.05)及H2O2+NAC组(0.492±0.049,q=4.439,P＜0.05).H2O2+NAC组与对照组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值及p62/β肌动蛋白值差异均无统计学意义(P＞0.05).基因芯片结果显示,与对照组相比,H2O2组中有18个自噬相关lncRNA与黑素细胞提前衰老有关,从中筛选出了明显上调的自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1(差异＞10倍).结论 低浓度H2O2可使黑素细胞E-钙黏素表达下降,降低黑素细胞自噬水平,上调自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1表达水平.

关键词：白癜风、黑素细胞、细胞黏附、自噬、氧化性应激、过氧化氢、微管相关蛋白质类、E-钙黏素、长链非编码RNA

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资助基金：国家自然科学基金81171517、81872541、81602774National Natural Science Foundation of China 81171517,8187254,81602774

在线出版日期：2019-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：383-388