二甲双胍对HaCaT细胞增殖分化和炎症因子分泌的影响

摘要：

目的 研究二甲双胍对人角质形成细胞系HaCaT细胞的影响并分析其机制.方法 采用1、2、5、10、20、50 mmol/L二甲双胍分别作用于HaCaT细胞24、48、72 h,CCK8法检测二甲双胍对HaCaT细胞存活率的影响.流式细胞仪检测0(对照组)、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲双胍对培养48 h的HaCaT细胞周期和凋亡的影响,Western印迹法检测HaCaT细胞增殖和分化相关蛋白角蛋白16、角蛋白17、角蛋白1、内披蛋白,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及AKT/mTOR/STAT3通路蛋白表达水平的影响,ELISA检测HaCaT细胞炎症因子白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-23分泌水平.统计学分析采用SPSS19.0软件,不同浓度组间观察指标的变化采用单因素方差分析,不同时间和不同浓度组间比较采用重复测量方差分析,两两多重比较采用LSD-t检验.结果 CCK8法显示,二甲双胍对HaCaT细胞增殖有抑制作用(F=116.87,P＜0.05),且随着二甲双胍浓度的增加,细胞存活率逐渐降低.0、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲双胍干预HaCaT细胞48 h后,G2/M期细胞比例逐渐增加(5.55％±1.03％、6.37％±0.93％、8.57％±1.18％、10.05％±0.60％、10.76％±0.87％、13.63％±1.41％,F=24.98,P＜0.05),早期细胞凋亡率逐渐升高(0.78％±0.71％、19.18％±1.41％、25.67％±1.34％、28.45％±0.92％、34.97％±2.12％、40.41％±1.49％,F=296.08,P＜0.05);随二甲双胍浓度增加,角蛋白1、促凋亡蛋白Bax蛋白表达呈上升趋势(F=8.86、5.38,均P＜0.05),角蛋白16、角蛋白17、凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达呈下降趋势(F=8.02、4.82、12.10,均P＜0.05),但各浓度组间内披蛋白的表达差异无统计学意义(F=0.57,P＞0.05);不同浓度二甲双胍干预48 h后,HaCaT细胞IL-8、TNF-α表达水平明显下降(F=33.89、14.99,均P＜0.05),但IL-23表达无明显变化(F=2.12,P＞0.05).随二甲双胍浓度增加,p-AKT、p-mTOR、p-STAT3表达水平逐渐下降(F=11.38、0.35、4.38,均P＜0.05),而AKT、mTOR、STAT3蛋白表达差异无统计学意义(F=0.66、0.35、4.24,均P＞0.05).结论 二甲双胍可能通过调控AKT/mTOR/STAT3信号通路抑制HaCaT细胞增殖,促进HaCaT细胞分化,促进细胞凋亡及抑制炎症因子分泌.

关键词：二甲双胍、细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化、HaCaT细胞

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资助基金：国家自然科学基金81572680;北京市科技计划课题项目Z181100001718038;解放军总医院临床科研扶持项目2016FC-TSYS-1003National Natural Science Foundation of China81572680;Beijing Science and Technology Planning ProjectZ11100001718038;Clinical Research Support Project of PLA General Hospital2016FC-TSYS-1003

在线出版日期：2019-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：25-32