梅毒螺旋体诱导巨噬细胞分泌的外泌体特征及其对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

摘要：

目的 探讨梅毒螺旋体(Tp)体外诱导巨噬细胞分泌的外泌体特征及其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖水平的影响.方法 自雄兔睾丸分离Tp.将人单核巨噬细胞(THP-1)诱导为巨噬细胞后,分为实验组(Tp刺激)和对照组(不用Tp刺激),12h后继续培养48 h,收集巨噬细胞外泌体悬液,利用差速离心法和膜亲和试剂盒提取外泌体,运用透射电镜、Western印迹鉴定外泌体,Nanoparticle tracking analysis (NTA)粒径分析仪定量分析外泌体.将HUVEC分为实验组、对照组和外泌体洗脱液组,分别用外泌体悬液(4.5×108颗粒,实验组和对照组)、外泌体洗脱液刺激培养一定时间后,激光共聚焦扫描显微镜观察HUVEC对外泌体的吞噬,CCK8法检测HUVEC增殖活性.结果 透射电镜下的外泌体呈杯托样,为直径30～100 nm的微小囊泡.Western印迹显示,外泌体丰富表达膜蛋白CD63、CD9和CD81.相同实验条件下,NTA测定显示,实验组与对照组外泌体粒径(u=1.90,P＞ 0.05)、浓度(z=-1.604,P=0.109)差异均无统计学意义.两组外泌体分别与HUVEC共培养5h后,激光共聚焦显微镜下见胞内散在分布被吞噬的绿色荧光外泌体.实验组、对照组外泌体分别作用于HUVEC 12 h后细胞增殖水平均高于外泌体洗脱液组,差异均有统计学意义(P＜0.05);在24 h和48 h时对照组细胞增殖水平仍高于外泌体洗脱液组,在48 h达到峰值(P＜0.05),实验组细胞增殖水平趋于正常;在72 h时实验组、对照组细胞增殖水平与外泌体洗脱液组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 THP-1来源的巨噬细胞分泌的外泌体在48 h内能显著提高HUVEC细胞增殖水平,在48 h达到峰值.在Tp刺激下,THP-1来源的巨噬细胞分泌的外泌体在形态、大小、浓度上与无Tp刺激巨噬细胞分泌的外泌体相似,但仅在短时间(12h)内提高HUVEC增殖水平.

关键词：苍白密螺旋体、巨噬细胞、外泌体、人脐静脉内皮细胞、细胞增殖

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在线出版日期：2018-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：341-346