生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响

摘要：

目的 探讨生存素小分子干扰RNA(siRNA)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响.方法 培养的A431细胞分为3组:生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组,分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染.实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达.采用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 转染后48 h,生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56±0.15、0.88±0.37、0.90±0.43,蛋白表达水平分别为0.59±0.04、0.86±0.05、0.91±0.07,差异均有统计学意义(F=276.67、243.61,均P＜ 0.001),且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05),而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(均P＞ 0.05).重复测量方差分析显示,转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖(F=13.19,P=0.004),且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组(均P＜ 0.05),而阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).转染后24 h,3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义(F=83.97,P=0.002),且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组(P＜0.05)和空白对照组(P＜ 0.05),而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).转染后48 h,生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组(P＜0.05)和空白对照组(P＜0.05),而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组(均P＜ 0.05)和阴性对照组(均P＜0.05).结论 生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点.

关键词：肿瘤、鳞状细胞、RNA、小分子干扰、细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、细胞运动、生存素、A431细胞

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在线出版日期：2018-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：305-309