H2O2对人皮肤成纤维细胞衰老标记蛋白30及自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达的影响

摘要：

目的 探讨H2O2对人皮肤成纤维细胞(NHSF)衰老标记蛋白30(SMP30)以及细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ型(LC3 Ⅱ)的影响.方法 用150 μmol/L H2O2处理2～4代NHSF2h,构建细胞衰老模型作为H2O2组,而未处理的NHSF作为对照组.细胞衰老β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测衰老细胞比例,间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3的表达,反转录PCR(RT-PCR)检测SMP30 mRNA的表达,Western印迹法检测SMP30和LC3蛋白的表达.结果 H2O2组NHSF的SA-β-gal染色阳性率(41.70％±2.95％)显著高于对照组(3.03％±0.25％,t=22.59,P＜0.05).间接免疫荧光结果显示,H2O2组NHSF LC3阳性率(12.60％±1.57％)明显低于对照组(23.67％±3.04％,t=5.61,P＜0.05).Western印迹显示,H2O2组LC3 Ⅰ/GAPDH比值(0.40±0.02)与对照组(0.41±0.04)比较差异无统计学意义(P＞0.05),而H2O2组LC3 Ⅱ/GAPDH比值(0.20±0.02)明显低于对照组(0.80±0.03,t=29.69,P＜0.05),且H2O2组LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值(0.51±0.03)亦明显低于对照组(1.98±0.23,t=10.967,P＜0.05).H2O2组SMP30mRNA和蛋白水平(与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.16±0.01和0.27±0.02)明显低于对照组(分别为0.35±0.01和0.63±0.02),均P＜0.05.结论 H2O2可降低NHSF中SMP30及LC3 Ⅱ的表达水平,加速NHSF衰老.

关键词：皮肤衰老、过氧化氢、成纤维细胞、自噬、衰老标记蛋白30、LC3 Ⅱ

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分类号：R73;R68

资助基金：国家自然科学基金81101212、81574037、81674039;中国博士后科学基金2016M602271;湖北省自然科学基金2012FFC83、2015CFB577;湖北省卫生计生委科学基金WJ2015MB203;武汉市卫生计生委科学基金WX12B20、WX16D30;武汉市中青年医学骨干人才培养工程基金2015 National Natural Science Foundation of China81101212,81574037,81674039;China Postdoctoral Science Foundation2016M602271;Natural Science Foundation of Hubei Province of China2012FFC83,2015CFB577;Science Foundation of Health and Family Planning Commission of Hubei ProvinceWJ2015MB203;Science Foundation of Health and Family Planning Commission of Wuhan MunicipalityWX12B20,WX16D30;Training Project for Young and Middle-aged Core Talents of Health System of Wuhan City2015

在线出版日期：2018-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：899-903