重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

摘要：

目的 研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制.方法 采用CCK8法测定0(对照组)、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;荧光染料(DCFH-DA)测定A375细胞内活性氧的变化;罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化;利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印迹法检测A375细胞内Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)表达.多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q检验.结果 在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响,但能明显抑制A375细胞的增殖(P＜0.01);荧光显微镜下发现,重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞出现明显的凋亡形态.0(对照组)、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后,随重楼皂苷Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率(分别为4.25％±1.27％、10.03％±1.49％、36.62％±1.97％、44.11％±2.47％)逐渐升高(F=665.7,P＜0.01),G0/G1期细胞比例(分别为54.13％±2.57％、67.35％±3.79％、74.39％±3.29％、82.29％±3.99％)亦渐增多(F=71.81,P＜0.01);细胞内活性氧呈明显上升趋势,细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势(P＜0.01);细胞内ATP含量下降(P＜ 0.01),培养液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升(P＜0.01);细胞Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达增多,但Cyclin D1、Bcl-2和PKM2蛋白表达下降(P＜0.01).结论 重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生,引起线粒体膜电位下降,诱导A375细胞凋亡,并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达,使细胞阻滞于G0/G1期.

关键词：黑素瘤、细胞系、肿瘤、细胞凋亡、活性氧、细胞增殖、重楼皂苷Ⅰ

所属期刊栏目：50

分类号：R92;R73

资助基金：湖北省卫生计生委中西医结合科研计划项目2013Z-B05Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Research Project of Health and Family Planning Commission of Hubei Province 2013Z-B05

在线出版日期：2018-01-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：883-888