原代人黑素细胞Wnt5A基因沉默的研究

摘要：

目的 优化Wnt5A特异性siRNA转染原代人黑素细胞的实验条件,建立沉默Wnt5A基因的模型.方法 培养原代人黑素细胞,将不同浓度(0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L)的阳性参照基因GAPDH特异性siRNA通过脂质体法介导转染原代人黑素细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)筛选转染效率最高的siRNA浓度;合成3条Wnt5A-siRNA(Wnt5A-siRNA-793、Wnt5A-siRNA-943、Wnt5A-siRNA-1743),分别转染原代人表皮黑素细胞,qPCR法选择干扰特异性最佳的Wnt5A-siRNA;用最佳Wnt5A-siRNA转染原代人黑素细胞,分别于培养24、48、72 h提取总mRNA及总蛋白,通过qPCR及Western印迹法确定转染效率最高的时间点.结果 0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L GAPDH-siRNA转染原代人黑素细胞后,GAPDH mRNA相对表达量分别为1.009±0.161、0.086±0.010、0.140±0.016、0.285±0.095、0.012±0.007,组间比较,差异有统计学意义(F=69.469,P＜0.05).60 nmol/L siRNA组GAPDH表达低于其他各组(均P＜0.05),干扰效率最佳;各Wnt5A-siRNA组及空白组Wnt5AmRNA相对表达量分别为0.331±0.010、2.229±0.029、0.078±0.006、1.000±0.024,差异有统计学意义(F=7 006.094,P＜0.05).Wnt5A-siRNA-1743组目标分子表达量低于其他3组(均P＜0.05),干扰效率最佳.Wnt5A-siRNA-1743转染原代人表皮黑素细胞后24、48、72 h及空白组Wnt5A mRNA相对表达量分别为0.396±0.002、0.026±0.008、0.131±0.079、1.025±0.276,组间比较,差异有统计学意义(F=29.215,P＜0.05),干扰后48 h低于干扰后24、72 h及空白组(均P＜0.05);Wnt5A蛋白相对表达量分别为112.798±0.218、77.765±0.415、30.540±0.219、130.025±0.158,组间比较,差异有统计学意义(F=79 122.889,P＜0.05),干扰后72 h低于干扰后24、48 h及空白组(均P＜0.05).结论 成功建立siRNA沉默人黑素细胞Wnt5A基因的模型.

关键词：黑素细胞、RNA、小分子干扰、基因沉默、Wnt5A

所属期刊栏目：50

分类号：R75;R73

资助基金：江苏省自然科学基金BK2012507Natural Science Foundation of Jiangsu Province of China BK2012507

在线出版日期：2017-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：706-709