靶向调控皮肤恶性黑素瘤潜在致病基因CCL18的miRNA预测及表达相关性分析

摘要：

目的 探讨靶向调控皮肤恶性黑素瘤潜在致病基因CCL18的miRNA.方法 用miRanda和TargetScan在线软件进行生物信息学分析,预测靶向调控CCL18基因的miRNA.根据人基因序列分析构建CCL18基因3'UTR双荧光素酶报告载体及miRNA载体,共转染293T细胞48 h后裂解细胞并检测荧光素酶活性.其中,CCL18基因3'UTR双荧光素酶报告载体分3'UTR突变型组、3'UTR野生型组和空白对照组,miRNA载体携带筛选的miRNA.应用实时荧光定量PCR检测14例黑素瘤新鲜组织及瘤旁正常皮肤组织(对照)中CCL18和筛选miRNA的表达,并对其相关性进行分析.结果 在线软件分析显示,CCL18-3'UTR具有miR-183、miR-128、miR-33a等miRNA的作用靶点.成功构建荧光素酶报告载体及miRNA载体,荧光素酶活性检测显示,miR-183、miR-128的3'UTR突变型组荧光素酶表达量(11.63±0.42;8.80±0.49)明显高于3'UTR野生型组(4.86±0.39;5.01±0.54)及空白对照组(2.41±0.13;2.39±0.05),差异有统计学意义(均P＜0.01),而miR-33a的3'UTR突变型组荧光素酶表达量与3'UTR野生型组差异无统计学意义(6.41±0.47比6.16±0.22,P＞0.05).实时荧光定量PCR显示,14例黑素瘤肿瘤组织中CCL18基因的相对表达量(3.52±1.68)高于对照组织,而miR-183(0.49±0.32)、miR-128(0.30±0.20)、miR-33a(0.46±0.40)的相对表达量均低于对照组织.CCL18表达水平与miR-128表达水平呈负相关(rs=-0.548,P＜0.05),而与miR-183、miR-33a表达水平无相关性(P＞0.05).结论 miR-128可能参与调控皮肤恶性黑素瘤潜在致病基因CCL18.

关键词：黑色素瘤、微RNAs、RNA、小分子干扰、趋化因子CCL18

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分类号：R73;R3

资助基金：National Natural Science Foundation of China81772916;Natural Science Foundation of Jiangsu Province of China BK2012505,BK20171132国家自然科学基金81772916;江苏省自然科学基金BK2012505、BK20171132

在线出版日期：2017-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：631-635