Wnt5A基因过表达对黑素细胞骨架蛋白的影响

摘要：

目的 探讨携带Wnt5A全基因序列的质粒转染原代黑素细胞后,Wnt5A表达升高对黑素细胞骨架蛋白的影响.方法 培养原代人表皮黑素细胞,并分为3组:①空白对照组:除细胞外不加任何试剂;②阴性对照组:加入空白的去内毒素pcDNA3.1(+)质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000;③Wnt5A质粒组:加入Wnt5A去内毒素pcDNA3.1(+)质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000.Wnt5A质粒转染黑素细胞,采用qPCR法检测各组Wnt5A、Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)、丝状肌动蛋白(F肌动蛋白)和β微管蛋白基因表达,Western印迹法测定Wnt5A、酪氨酸激酶受体2(ROR2)、Rac1、F肌动蛋白和β微管蛋白表达,并通过细胞免疫荧光试验观察细胞骨架蛋白表达情况.结果 qPCR法显示,Wnt5A质粒组、阴性对照组和空白对照组Wnt5A mRNA及其下游基因Rac1和F肌动蛋白rnRNA表达量3组间差异均有统计学意义(F=1374.179、112.576、66.458,均P＜0.01),但β微管蛋白mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).Wnt5A质粒组Wnt5A、Rac1和F肌动蛋白mRNA表达量均显著高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05).Western印迹法显示,Wnt5A质粒组Wnt5A蛋白表达较空白对照及阴性对照明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).Wnt5A质粒组Rac1、ROR2、F肌动蛋白表达均明显低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05),但β微管蛋白表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).细胞免疫荧光实验显示,Wnt5A质粒组绿色(β微管蛋白)、红色(F肌动蛋白)荧光强度与两个对照组相比均无明显差别,但黑素细胞体积明显增大,树突数目明显增多,细胞骨架显著改变,表现为F肌动蛋白强弱不一,纹理模糊,张力丝断裂,局部呈团块状.结论 黑素细胞Wnt5A基因表达升高可调控细胞骨架相关基因及蛋白表达,使黑素细胞体积增大、树突增多、骨架改变,可能有利于黑素小体的输送传递,参与色素沉着性疾病的发病.

关键词：黑素细胞、Wnt信号通路、细胞骨架、肌动蛋白类、微管蛋白、rac1 GTP结合蛋白质、Wnt5A蛋白质

所属期刊栏目：50

分类号：R73;R3

资助基金：江苏省自然科学基金BK2012507Natural Science Foundation of Jiangsu Province of China BK2012507

在线出版日期：2017-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：584-588