转谷氨酰胺酶3与树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子体外结合能力研究

摘要：

目的 检测树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附分子(DC-SIGN)转染的HEK293T细胞和单核细胞来源的树突细胞(MDDC)膜表面DC-SIGN受体对转谷氨酰胺酶3(TG3)的识别和摄取能力.方法 采用脂质体转染的方法将融合有DC-SIGN基因片段及真核表达载体pGCMV-EGFP(增强绿色荧光蛋白)的质粒转染至HEK293T细胞,制备DC-SIGN-EGFP-HEK293T细胞;通过磁珠阴性分选出外周血中CD14+单核细胞,并通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导获得MDDC.利用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测转染的HEK293T细胞及MDDC上DC-SIGN受体对TG3蛋白的识别和摄取,并设立空白对照组(不加入Alexa Fluor-647染料标记的TG3)和阴性对照组(仅加入Alexa Fluor-647染料).结果 TG3与HEK293T和MDDC细胞孵育3h后,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪均显示,TG3可以被HEK293T及MDDC细胞上DC-SIGN受体识别并结合摄取入细胞内,流式细胞仪检测显示TG3与MDDC的结合可被DC-SIGN阻断抗体部分阻断.阴性对照组和空白对照组未见HEK393T或MDDC细胞对TG3的识别和结合.结论 TG3可以作为一种自身抗原被DC-SIGN受体识别、结合,并被介导摄取进入树突细胞.

关键词：树突细胞、自身抗原、外源凝集素类、C型、受体、模式识别、转谷氨酰胺酶3、树突细胞特异性非整合素黏附分子

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分类号：R31;R73

资助基金：国家自然科学基金81371735、81573045;2014年亚美医学基金会MMAAP皮肤病项目基金;江苏省自然科学基金BK20150166National Natural Science Foundation of China81371735,81573045;Milstein Medical Asian American Partnership MMAAPFoundation Research Project Award in Skin Disease in 2014;Natural Science Foundation of Jiangsu Province of ChinaBK20151066

在线出版日期：2017-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：579-583