沙眼衣原体pORF5质粒蛋白抑制肿瘤坏死因子α诱导HeLa细胞凋亡

摘要：

目的 探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡的影响.方法 将含pORF5基因的慢病毒重组表达载体与辅助质粒共转染293T细胞制备慢病毒,慢病毒收集浓缩后再感染HeLa细胞,流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株(pORF5-HeLa),同时建立空载体转染对照细胞株(对照HeLa).将两种细胞株分别分为两组,一组用20μg/L TNF-α处理(处理组),一组仅用新鲜培养基培养(未处理组),作用6 h,Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时PCR检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2和Bax mRNA表达水平,Western印迹检测Bax、Bcl-2蛋白表达水平.结果 TNF-α处理细胞6 h后,Hoechst33258染色发现pORF5-HeLa和对照HeLa细胞中均可见不同程度的核固缩、碎裂,高亮蓝色凋亡小体;pORF5-HeLa细胞的凋亡率为(35.5±4.5)%,对照HeLa细胞凋亡率为(63.6±5.8)%,均显著高于相应未处理组[(9.5±1.5)%和(7.9±0.9)%,t值分别为13.53、32.36,均P<0.01].处理组pORF5-HeLa细胞中Bax和Caspase3 mRNA表达水平较处理组对照HeLa细胞分别降低72.8%和84.5%(t值分别为35.29,42.25,均P<0.01),但Bcl-2 mRNA的表达水平显著高于处理组对照HeLa细胞(t=87.12,P<0.01).处理组pORF5-HeLa细胞中Bax蛋白表达水平亦显著低于处理组对照HeLa细胞(t=17.58,P<0.01),而Bcl-2蛋白表达水平较对照HeLa细胞增加6.8倍,差异有统计学意义(t=18.93,P<0.01).结论 pORF5可能通过增强抗凋亡蛋白Bcl-2降低促凋亡蛋白Caspase3和Bax的表达,抑制TNF-α诱导的HeLa细胞凋亡.

关键词：沙眼衣原体、细胞凋亡、肿瘤坏死因子α、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、bcl-2相关X蛋白质、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白、pORF5质粒蛋白

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分类号：R54;R73

资助基金：National Natural Science Foundation of China31470277, 81102230, 31300156国家自然科学基金31470277、81102230、31300156

在线出版日期：2017-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：341-345