白细胞介素2基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞对恶性黑素瘤细胞的杀伤作用

摘要：

目的 探讨白细胞介素2(IL-2)基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对恶性黑素瘤的杀伤能力.方法 提取小鼠脾细胞,分离淋巴细胞,培养CIK细胞,用携带IL-2的质粒PEGF-N1-IL-2转染CIK细胞,荧光显微镜观察质粒转染情况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定IL-2基因的表达.将效应细胞(CIK细胞或IL-2转染CIK细胞)和靶细胞(B16黑素瘤细胞)分别按照效靶比10∶1、20∶1和40∶1混合培养,采用4h乳酸脱氢酶释放测定法,检测两种CIK细胞对B16细胞的细胞毒活性.按照效靶比40∶1混合,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测两种CIK细胞IL-2、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.建立小鼠黑素瘤模型,将28只模型小鼠平均分为4组:对照组(瘤旁注射0.2 ml生理氯化钠溶液)、IL-2组(瘤旁注射100 IU IL-2)、CIK组(瘤旁注射细胞数约1×106 CIK细胞悬液)、IL-2转染CIK组(瘤旁注射细胞数约1×106 IL-2转染CIK细胞悬液),通过肿瘤形态学和抑瘤率、细胞凋亡率来评价荷瘤小鼠肿瘤生长情况.两组正态分布计量资料的比较行t检验,多组计量资料的比较采用方差分析,两两间多重比较采用LSD-t检验.结果 荧光显微镜及RT-PCR均显示IL-2转染CIK细胞成功.效靶比实验显示,40∶1时IL-2转染CIK细胞对B16细胞的毒性最强,IL-2转染CIK细胞组分泌IL-2 (1107.26±6.49 pg/ml)、IFN-γ(50.01±3.35 pg/ml)和TNF-α(39.86±3.25 pg/ml)的能力明显高于CIK细胞组(分别为51.09±3.85、32.71±2.43、30.11±3.08 pg/ml),两组比较,t值分别为442.60、14.93和6.89,差异均有统计学意义(P＜0.01).动物实验显示,与干预前相比,干预后对照组小鼠肿瘤体积明显增大(P＜0.05),而IL-2组、CIK组和IL-2转染CIK组小鼠肿瘤体积明显减小(P＜ 0.001),且IL-2转染CIK组肿瘤体积显著小于其他3组(均P＜0.01),但IL-2组和CIK组差异无统计学意义(P＞0.05).CIK组、IL-2组和IL-2转染CIK组的细胞凋亡率均显著大于对照组(P＜0.01),IL-2转染CIK组的细胞凋亡率及抑瘤率均显著大于IL-2组和CIK组(P＜ 0.01),而IL-2组和CIK组细胞凋亡率及抑瘤率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-2转染CIK细胞对恶性黑素瘤有更强的杀伤作用.

关键词：白细胞介素2、细胞因子诱导杀伤细胞、转染、黑色素瘤

所属期刊栏目：50

分类号：R73;R45

资助基金：Clinical Research Project of Health and Family Planning Commission of Wuhan Municipality WX13D16武汉市卫计委临床医学科研课题WX13D16

在线出版日期：2017-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：257-262