晚期糖基化终末产物对UVA照射皮肤成纤维细胞组织蛋白酶D表达及其活性的影响

摘要：

目的：研究晚期糖基化终末产物（AGE）对长波紫外线（UVA）照射皮肤成纤维细胞组织蛋白酶D （CatD）表达和活性的影响。方法原代培养来自儿童包皮成纤维细胞。CCK?8法筛选对成纤维细胞无细胞毒性的AGE?牛血清白蛋白（BSA）浓度。分别以50、100、200 mg/L AGE?BSA孵育细胞24 h，以未处理细胞作为对照组，采用RT?PCR、Western印迹及荧光法检测AGE?BSA对细胞CatD表达和活性影响。将部分成纤维细胞分为6组，即对照组（正常皮肤成纤维细胞，不接受任何处理）、AGE?BSA组、BSA组、UVA组、UVA?AGE?BSA组、UVA?BSA组。AGE?BSA组加入最大无细胞毒性浓度AGE?BSA孵育24 h，BSA组加入相同浓度BSA孵育24 h，后3组除分别接受上述处理外再接受10 J/cm2 UVA照射。处理结束后，收集细胞mRNA和蛋白，采用RT?PCR、Western印迹及荧光法检测细胞CatD表达和活性。结果50、100、200 mg/L AGE?BSA对皮肤成纤维细胞增殖活性无显著影响。50 mg/L组、100 mg/L组、200 mg/L组细胞CatD mRNA水平分别为0.267±0.007、0.348±0.007、0.418±0.006，CatD蛋白水平分别为1.403±0.181、2.233±0.090、2.477±0.111，CatD活性分别为1.760±0.080、2.330±0.060、2.890±0.080，较相应对照组CatD mRNA（0.161±0.006）、CatD蛋白（0.903±0.200）以及CatD活性水平（1.100±0.090）均显著升高，均P<0.05。AGE?BSA呈剂量依赖性地刺激细胞CatD表达和活性。对照组、UVA组和UVA?AGE?BSA组细胞中CatD mRNA表达水平分别为0.155±0.005、0.480±0.005、0.394±0.008，蛋白表达水平分别为0.920±0.235、2.583±0.199、2.070±0.125，CatD活性分别为1.110±0.040、2.970±0.110、2.560±0.060；UVA组CatD mRNA水平、蛋白表达水平、酶活性均明显高于对照组（P<0.05），但UVA?AGE?BSA组3种指标水平均显著低于UVA组（P<0.05）。结论 AGE可升高未接受UVA照射的皮肤成纤维细胞CatD表达和活性，但AGE却抑制UVA照射上调的CatD表达和酶活性。

关键词：成纤维细胞、糖基化终产物、高级、紫外线、组织蛋白酶D

所属期刊栏目：49

分类号：R31;R3

资助基金：国家自然科学基金81201241；广东省第一批产业技术研究与开发资金计划项目2012B031800057

在线出版日期：2016-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：582-586