过表达NF-E2相关因子2对白癜风黑素细胞PIG3V线粒体生物合成和功能的影响

摘要：

目的 探讨过表达NF-E2相关因子2(Nrf2)对黑素细胞线粒体合成和功能的影响.方法 构建含有人Nrf2基因全长的过表达质粒Nrf2-pEX-1,用该质粒瞬时转染白癜风患者表皮黑素细胞系(PIG3V).实验分为空白组(不含质粒)、对照组(转染pEX-1空质粒)、过表达组(转染pEX-1-Nrf2过表达质粒).过表达Nrf2后,RT-PCR和Western印迹法检测PIG3V线粒体生物合成相关的Nrf2、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)mRNA和蛋白水平的变化;RT-PCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数.流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);荧光素酶报告系统检测细胞ATP含量.采用两样本t检验进行统计学分析.结果 Nrf2过表达质粒转染PIG3V细胞后24 h,Nrf2 mRNA、NRF1 mRNA水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(均P＜0.001),而TFAM mRNA水平与对照组比较差异无统计学意义;48 h后Nrf2 mRNA、TFAM mRNA水平较对照组升高,差异均有统计学意义(P＜0.05),而NRF1 mRNA水平与对照组差异无统计学意义.Western印迹法显示,转染后24 h,过表达组Nrf2、NRF1、TFAM蛋白表达与对照组比较差异均无统计学意义,48 h后过表达组Nrf2、NRF1、TFAM蛋白表达升高(P＜0.05).过表达组MMP在转染24 h后较对照组升高2.313％(t=5.546,P=0.005),48 h后升高14.872％(t=8.537,P=0.001).线粒体合成指标相对mtDNA拷贝数,在转染24 h后两组间差异无统计学意义(P＞0.05),48 h后过表达组明显高于对照组(t=5.760,P=0.005);细胞ATP含量在转染后24 h两组间差异无统计学意义(P＞0.05),48 h后过表达组ATP含量较对照组明显升高(t=22.040,P=0.008).结论 过表达Nrf2可以促进黑素细胞线粒体生物合成相关基因和蛋白的表达,进而促进线粒体生物合成,上调线粒体功能相关的指标.

关键词：白癜风、黑素细胞、线粒体、NF-E2相关因子2、腺苷三磷酸

所属期刊栏目：48

分类号：R737.31;R541.4;R361.3

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2015-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：373-377