D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的克隆、表达、鉴定及其免疫原性初探

摘要：

目的 获得D型沙眼衣原体质粒蛋白pgp3基因及其蛋白,并鉴定其免疫原性.方法 PCR扩增目的基因,将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α,提取质粒进行酶切、测序、PCR鉴定.再将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达,Western印迹鉴定目的蛋白,谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠纯化pgp3-GST融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫新西兰家兔,Western印迹检测抗体与pgp3蛋白的结合,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价.结果 克隆目的基因序列长度为795 bp,与基因库中一致,Western印迹显示目的蛋白相对分子质量为54 000,并得到纯化蛋白.所得兔血清可识别pgp3蛋白,ELISA检测多克隆抗体效价达1∶25 600.结论 成功表达具有强免疫原性的pgp3-GST融合蛋白,为进一步研究奠定基础.

关键词：衣原体、沙眼、pgp3蛋白、重组融合蛋白质类、免疫法、疫苗、合成

所属期刊栏目：47

分类号：R737.25;S852.659.4;R373.9

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2014-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：333-336